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綠色荧光蛋白的基因克隆及表达
学号 08114010214 编号 2011140214 班级 生科0802
HUBEI NORMAL UNIVERSITY
分子生物学综合实验论文
论文题目 绿色荧光蛋白的基因克隆和表达 作者姓名 饶慧 指导教师 王友如 所在院系 生命科学学院 专业名称 生物科学 完成时间 2011.5.30
目 录
引言 1
1 材料与方法 4
1.1 材料 4
1.1.1 实验材料 4
1.1.2 仪器设备 4
1.1.3 试剂及溶液 5
1.2 方法 7
1.2.1 重组质粒的构建 7
1.2.2 DH-5α 和BL-21感受态细胞的制备 7
1.2.3 感受态细胞的转化 7
1.2.4 碱法提质粒 8
1.2.5 酶切鉴定 8
1.2.6 琼脂糖凝胶电泳 9
1.2.7 PCR-聚合酶链式反应 9
1.2.8 pET-28a-GFP重组质粒转化到表达菌BL-21 10
1.2.9 重组绿色荧光蛋白（GFP）的诱导表达 10
2 结果与分析 11
2.1 提取质粒 11
2.2 重组质粒构建的鉴定 12
2.3 PCR检测结果 12
2.4 IPTG诱导表达 13
3 讨论 14
参考文献 16
致谢 18
绿色荧光蛋白的基因克隆和表达研究
饶慧（指导老师：王友如）
（湖北师范学院生命科学学院 生物科学0802班 湖北 黄石 435002）
摘 要：目的：研究绿色荧光蛋白（Greed Fluorescent Protein，GFP）基因的基因克隆及在大肠杆菌中的表达。方法：通过分别将DH-5α (pEGFP-N3)和DH-5α(pET-28a)提取质粒、酶切并连接形成重组质粒pET-28a-GFP，将重组质粒导入E.coli DH-5α感受态细胞中进行转化,通过限制性核酸内切酶Not I与Bam H1和PCR对所建质粒进行分析鉴定后, 通过转化的方法把含绿色荧光蛋白（GFP）外源基因转入大肠杆菌体BL-21内进行表达，再用IPTG诱导GFP基因表达，可以看到显现绿色，判断GFP基因在大肠杆菌中成功表达。 结果：结果显示构建的重组质粒pET-28a-GFP在E.coli中成功表达。
关键词：绿色荧光蛋白；质粒重组；原核表达；诱导表达
中图分类号：Q53
Studies On Cloning and Expression of Green Fluorescent Protein gene
Rao Hui (Tutor: Wang youru)
(Class 0802, College of Life Sciences, Hubei Normal University, Huangshi, 435002)
Abstract: Objective:Studies indicated that the cloning and expression of the GFP gene in the E.coli. Methods: Extract the plasmid of the DH-5α(pEGFP-N3) and DH-5α (pET-28a). Then cutting by enzyme and connecting the two plasmids to form pET-28a-GFP recombined plasmid. The recombinant plasmid confirmed by restriction enzyme and PCR transfected into E.coli DH-5α to ensure the expression of green fluorescent protein. Guiding the recombined plasmid, which contains exogenous genes of GFP into E.coli for expression, through transformative method. The expression of GFP gene can be induced by the IPTG and then we can see green. Results: The results suggest that pET-28a-GFP recombined plasmid has successfully expressed in E.coli.
Keywords: Ged Fluorescent Protein; Recombined Plasmid; Prokaryote Expression; Induced Expression
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