研究生進修课程--临床病理学复习.docVIP

病理复习 请结合自己的专业，简单设计一个免疫组织化学标记的方案来研究一个课题.(一抗和二抗的名称和来源、一抗的定位预测；实验方案、生物学意义和临床意义、实验设计（每个对照组的意义）、结果判断。 一抗：STK15（Aurora-a）多克隆抗体（兔抗人） 二抗：二步法抗兔通用型免疫组化检测试剂盒 一抗的定位预测：表达在细胞浆中 实验方案：选择正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤、卵巢恶性肿瘤组织三组石蜡标本切片。通过抗体标记STK15（Aurora-a），经过免疫组化染色后根据染色颗粒的强度与分布来判定Aurora-a在细胞浆中的表达结果。 生物学意义：Aurora-a在人类多个肿瘤细胞系内被发现过度表达，是一种与中心体异常密切相关的基因，其过度表达导致中心体过度复制，从而引起染色体分离异常，导致细胞分裂阻滞，形成异倍体，引起抑癌基因的缺失或癌基因的获得或激活，从而引起细胞恶性转化，促进肿瘤的发生。 临床意义：Aurora-a的异常可能与恶性肿瘤的病理特点、临床分期、及预后有某些相关性。它在早期肿瘤中均有阳性表达，表明Aurora-a蛋白水平的改变在卵巢癌中是常发事件，可能代表了卵巢癌的早期病变，在卵巢癌的发病中起重要作用。抑制Aurora-a激酶的活性有可能成为一个治疗肿瘤的有效手段。 实验设计：通过设立卵巢恶性肿瘤、卵巢良性肿瘤和正常卵巢组织的对照组，对比各组所研究Aurora-a在不同组织中表达的差异，进而得出实验结论。 结果判断：采用S-P免疫组化染色后，利用电脑的病理图文报告分析系统进行结果判读，对染色结果定量分析，记各组织片内肿瘤细胞Aurora-a蛋白的表达情况。 免疫组化的应用范围：（1）提高病理诊断准确性 （2）对疾病的预后和治疗的意义 （3）癌基因蛋白的应用 （4）对肿瘤增生程度的评价 ki67 PCNA （5）微小病灶的发现 微小癌 微小病灶（如羊水栓塞） （6）在肿瘤分期上的意义 （7）指导肿瘤治疗 （8）免疫性疾病的辅助诊断 （9）病原微生物的检测 ABC复合物：ABC法是利用卵白素与生物素特有的高度亲和力这一生物学性质，先将生物素与辣根过氧化物酶(HRP)结合，形成生物素化HRP，然后与卵白素按一定比例混合，形成ABC复合物。卵白素-生物素-过氧化物酶复合物。 何谓抗原修复 组织在制作过程中，由于化学试剂的作用封闭了抗原，又由于热的作用致使部分抗原的肽链发生扭曲，致使在免疫组化的染色过程中不能将其显示出来，为了解决上述的问题，利用化学试剂和热的作用将这些抗原重新暴露出来或修正过来的过程称为抗原修复。 掌握免疫组化在临床上应用的初步方案。A：已知的特异性抗体或抗原能特异性结合。B： 通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂，如酶，金属离子、同位素等，显示一定的信号（如：颜色）。C： 借助显微镜、荧光显微镜或电子显微镜观察其颜色变化，从而在抗原抗体结合部位确定组织、细胞结构。 “套餐式”免疫标记：免疫组织化学技术以抗原抗体反应为其理论基础，对肿瘤的诊断和鉴别诊断有重要作用。目前常用抗体分为上皮性、间叶组织、神经及神经内分泌、淋巴细胞标志物等四类。由于肿瘤类型极多，部分肿瘤的诊断和分型又极其困难，因此诊断一些肿瘤的免疫组化方案必须是“套餐式”的，即每一种组织的标记物必须用2种以上的抗体，除了能够阳性正面证实的抗体，还要有能阴性反面证实的抗体。 例如： a. Keratin,Vimentin,LCA,S100四种抗体组合，Keratin阳性且其它阴性的结果可以筛选 出可疑癌或生殖细胞瘤；Vimentin和LCA阳性的结果可以筛选出可疑淋巴瘤；Vimentin和S100阳性的结果可以筛选出可疑神经内分泌肿瘤；Vimentin阳性的结果可以筛选出可疑肉瘤。 b. 在Keratin阳性的肿瘤中，CK17和CK18阳性的结果提示移行细胞癌和某些管状腺癌； CK17阳性和CK18阴性的结果提示鳞癌、皮肤、鼻咽、食道癌等；CK17阴性和CK18阳性的结果提示腺癌。 分子病理学临床应用的进展，举例说明。 临床病理学的发展趋向：三段式诊断：形态学诊断+免疫学标记+分子诊断。在经典病理学的基础上，采用现代辅助手段，提高病理诊断率和预测(预后)率。临床分子病理学常用方法：免疫组织化学，基因克隆性重排的检测，FISH及CGH，等位基因不平衡分析，杂合性缺失（LOH）的检测，微卫星DNA不稳定性（MSI）的检测。I. TUNEL-免疫组化在细胞凋亡检测中的应用；2.免疫组化多重标记的应用，临床上IgH和TCR基因单克隆检测在淋巴瘤的分子诊断中普遍应用。当前分子病理学技术在临床的实际应用：肺癌的分子病理学（60%～85%的NSCLC-腺癌细胞存在EGFR突变／