液相色譜仪基本配置和注意事项.docVIP

液相色谱仪基本配置和注意事项 一、液相色谱仪的基本配置和构成有：液相泵、色谱柱、检测器数据处理、进样器、柱温箱。二、液相基本组成1、输液泵2、进样单元3、分离单元（色谱柱）4、检测器三、常用液相单元的故障及解决1、输液泵2、手动进样阀3、色谱柱4、检测器（一）输液泵的操作液相色谱输液泵一般由入口单向阀、出口单向阀、注塞杆、泵密封圈等组成，是液相色谱的重要组成部分，要保持泵的良好操作规程。必须维护系统的清洗，保证溶剂的纯度：（1）用高纯度的试剂和HPLC 级溶剂（2）过滤流动相和溶剂（3）脱气（4）再次使用前放空脱气，工作结束从泵中洗去缓冲液（最好另外清洗柱塞）（5）不让水或腐蚀性溶剂滞留泵中（6）定期更换泵垫圈（7）查阅有关泵的操作手册（二） 手动进样阀1、正确的进样方式（1）手动进样阀在INJECT 位置：把取存试液的进样针导入进样孔，直到插入为止（必须穿过转子密封圈聚四氯乙烯套管）； （2）转动手柄到load 位置：把试液放入阀体中的定量环里；（3）同时转动手柄到INJECT 位置：试液进入液路。2、进样前样品处理及注意事项（1）须用专用平头液相专用注射器进样（禁用气相尖头进样针）； （2）进样试液应无颗粒、浑浊和乳化，使用前先用超声波溶解后，须用0.45um 的过滤膜过滤；（3）部分装取样时，取样体积一般小于定管的50%，完全装液相取样体积取必须是定量环的5 倍以上（特别是高要求分析中外标定量）； （4）如流动相使用缓冲盐（或酸性、碱性）在使用结束时必须用蒸溜水在load 和INJECT 位置反复冲洗干净，因盐析出会损害转子、定子密封圈；3、进样阀故障及维护（1）在进样针与进样阀不相配（针外径偏小）情况，可以用铅笔的橡皮头将针导管压入少许，使密封环变小达到严格密封；（2）转子密封圈漏液的维护：① 转子密封圈少量漏液，拧松手柄六角螺钉，手柄沿轴方向送进，使手柄里的突出部嵌入压力调整螺钉缺口，旋转手柄1/20 圈，直到不漏液为止；② 转子密封圈损坏，通过方法①还漏液则需要更换转子密封圈。拧下三个定子螺钉，从主体上卸下转子密封圈，用手柄拧松压力调整螺钉半圈（☆）安装上三个定子螺母均等地牢牢拧紧，再来调整压力螺丝拧到原来红色标记位置。（三）液相色谱柱1、正确的使用方法（1）进样的试样最好称量，超声波溶解，样品过滤器过滤后进入色谱；（2）在有条件情况下，最好一个样品使用一支色谱柱，可延长柱使用寿命；（3）色谱柱在使用后必须冲洗干净后方可保存过夜；（4）对于使用酸、碱、缓冲盐的流动相，柱子必须用蒸溜水（含5%有机溶剂）冲洗干净，再用甲醇、乙腈冲洗保护（对反相柱）。2、色谱柱的维护（1）流动相所用试剂尽可能是色谱纯试剂，水最好是超纯水或全玻璃双重蒸溜水；（2）流动相使用前用溶剂过滤器除去可能存在的微粒，流动相应现用现配。对含盐的流液尤其应注意长时间会产生细菌或出现沉淀；（3）柱子在使用过程中会产生：①塔板数下降②峰形变差③压力增加④保留时间变化。为使柱子使用寿命延长A 每天使用完后必须当天冲洗干净；B 压力增大时，可能是过滤筛板污染，可以将柱头螺母卸下取出滤片并将其在20% 的硝酸溶液里超声波清洗约15 分钟，再用纯水超声波清洗10 分钟，重新装入色谱柱；（4）色谱柱的再生A. 反相柱分别用甲醇：水=90：10，纯甲醇，二氯甲烷做流动相依次冲洗，每次冲洗体积为柱体积的30 倍，然后以相反顺序冲洗；B. 正相柱分别用正己烷，异丙醇，二氯甲烷，甲醇做流动相依次冲洗，每次为柱体积的30 倍，甲醇冲洗完以后再以相反的次序冲洗，至正己烷。注意使用流动相必须严格脱水。（四）紫外检测器紫外检测器是应用最广泛的检测器，可测190-350mm 光吸收变化，其结构基本部件：氚灯流通值和传感器等等。应注意事项：1、氘灯的注意事项（1）在开动液相色谱仪时最好先开泵，等流入大致平衡后再开检测器，可以缩短氘灯使用时间，冲洗关机也一样。先关检测器，后冲洗；（2）在分析中没有较长时间间隔，可以不关检测器。2、流通池检测事项（1）流通池是各分离组分经色谱柱分离到检测器的通道。流通池应定期清洗检查，定期更换池垫圈；（2）流通池常见故障是产生气泡，噪音较大，流动相必须严格脱气，其次在检测器出口加一较长背压管；（3）不相互溶的溶剂没有中间过渡会产生气泡，以及噪音变大，故必须用异丙醇过渡后再换上新的溶剂；（4）流通池本身污染程度可以在UV-254nn 处检查，样品池和参比池的两处的光能量结果来判断。3、氘灯的更换（1）必须关闭检测器电源，等灯基本冷却后再操作；（2）氘灯使用可以通过检查实际使用时间和结合光能量来办；（3）氘灯更换必须戴手套，以防污染