液相色譜串联质谱测定面条和米粉中的硫脲.docVIP

液相色谱串联质谱测定面条和米粉中的硫脲 　　摘要：硫脲又称硫代尿素，是一种纺织品的化学漂白剂，曾一度作为防腐剂，广泛用于各类需要漂白、保鲜防腐的食品。向食品中加入硫脲可阻止褐变，表观光亮，略带半透明。硫脲被人体摄入后危害健康，抑制甲状腺和造血器官的机能，引起中枢神经麻痹及呼吸和心脏功能降低等，甚至导致死亡。 　　建立了米面制品中硫脲的液相色谱串联质谱(LCMS/MS)测定方法。实验优化了样品提取方法、液相色谱条件和质谱参数。样品用80%乙醇超声波提取，离子交换色谱分离，色谱柱为NUCLEOSIL1005SA阳离子交换柱，流动相为乙腈(1%乙酸 0.2%乙酸铵)水溶液(30∶70)，流速0.5mL/min。采用电喷雾质谱正离子模式电离，多反应选择离子检测，检测离子对为m/z77/60和m/z77/43，其中m/z77/60为定量离子对。结果表明:本方法简便快速、准确可靠，相对标准偏差4.0%;回收率为83%～90%;检出限为0.5mg/kg;定量下限为5mg/kg。 　　【关键词】硫脲，液相色谱，串联质谱，面条，米粉 　　1引言 　　目前，空气、水、土壤和生物等材料中硫脲的检测方法已有报道[1～4]，通常采用高效液相色谱法;Raffaelli等[5]报道了用大气压化学电离质谱法测定废水中的硫脲。但至今未见食品中硫脲检测的相关报道。由于食品基质复杂，采用液相色谱法干扰很大，且灵敏度较低。本研究采用液相色谱串联质谱(LCMS/MS)法检测面条和米粉中的硫脲，考察了样品的提取方法，优化了色谱条件和质谱条件。本方法简便快速、准确可靠，检出限为0.5mg/kg;定量下限为5mg/kg，适用于面条、米粉等米面制品中硫脲的测定。 　　2实验部分 　　2.1仪器与试剂 　　液相色谱/串联四级杆质谱联用仪;超声波发生器，功率250W，频率33kHz。 　　硫脲(纯度≥98.0%);硫脲标准溶液的配制：以水为溶剂配制质量浓度为1000mg/L的标准溶液，经0.22μm滤膜过滤后作为储备液。使用时用水逐级稀释至所需浓度;乙腈和甲醇(HPLC级);乙酸、乙酸胺、乙醇等;实验用水为二次蒸馏水。 　　2.2样品预处理 　　将样品用粉碎机粉碎，取2.0g粉碎后的样品置于具塞三角瓶中，加入20.0mL80%乙醇溶液，盖上盖，超声波振荡提取15min，将超声波提取后的样品混合物全部转移至离心管中，以3500r/min离心15min。移取上清液10.0mL至50mL烧杯中，在68℃水浴上浓缩至约1mL。然后转移至5mL刻度试管中，用水洗涤烧杯多次，洗涤液合并入1.0mL刻度的梨形瓶中，在50℃下吹氮浓缩定容至1.0mL。 　　2.3LCMS/MS测定 　　2.3.1HPLC条件色谱柱：阳离子交换柱(250mm×4.6mm，5μm);流动相：乙腈(1%乙酸 0.2%乙酸铵)水溶液(30∶70,V/V)，流速0.5mL/min。进样量5.0μL。 　　2.3.2质谱条件电喷雾(ESI)正离子电离模式。干燥气(N2)温度350℃;雾化气(N2)压力276kPa;干燥气(N2)流量9.00L/min;电喷雾电压4000V;检测离子对为m/z77/60和m/z77/43，其中m/z77/60为定量离子对;采集时间200ms;碎裂电压80V;碰撞能量36V(m/z77/60)和48V(m/z77/43)。 　　2.3.3测定方法取样品溶液和标准溶液各5.0μL注入液相色谱串联四级杆质谱仪进行分析，以其标准溶液峰的保留时间和质谱检测离子对m/z77/60和m/z77/43为依据进行定性分析，以定量离子对m/z77/60的峰面积计算样品中硫脲的含量。 　　3结果与讨论 　　3.1液相色谱条件的优化 　　考察了C18柱、C8柱、NH2键合相柱及阳离子交换柱对硫脲分离的影响。结果表明：采用C18色谱柱时，当流动相为乙腈水体系时[4]，硫脲几乎无保留;当乙腈比例降低至10%时，硫脲仅有少许保留，保留时间为2.7min(色谱柱规格为250mm×4.6mm，流速为1.0mL/min，下同);当在流动相中添加庚烷磺酸盐离子对试剂时，硫脲的保留时间并无明显增加。采用C8色谱柱时，当流动相为乙腈庚烷磺酸盐体系时，随着乙腈比例从65%，40%至5%逐渐减少，硫脲的保留时间从2.9min，3.0min至3.3min逐步增加，但保留时间仍太短。采用NH2键合相色谱柱时，当流动相为乙腈水体系时，随着乙腈比例依次从70%，80%，90%增加到100%，硫脲的保留时间也从3.47min，3.55min，3.65min延长到3.79min，但增加幅度不大，保留时间较短，且峰形较宽。