氣液相实验指导2011.docVIP

实验2 高效液相色谱法测定植物生长调节剂萘乙酸的含量 一、实验目的 1、学习高效液相色谱仪的操作。 2、了解高效液相色谱法测定萘乙酸的基本原理。 3、掌握高效液相色谱法进行定性及定量分析的基本方法。 二、实验原理 英文通用名 1-naphthlcetic acid 也称 a-萘乙酸（NAA），是广谱型植物生长调节剂，能促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根增加坐果，防止落果，改变雌、雄花比率等。可经叶片、树枝的嫩表皮，种子进入到植株内，随营养流输导到全株。低毒。对皮肤、粘膜 有刺激作用。在农业上常用于诱导单性结实，形成无籽果实，促进开花。低浓度促进植物的生长发育，高浓度引起内源乙烯的生成，从而有催熟增产的作用，还可提高某些作物的抗寒、旱、涝及盐的能力。 用反相高效液相色谱法测定萘乙酸的含量，将已配制的浓度不同的萘乙酸标准溶液进入色谱系统。如流动相流速和泵的压力在整个实验过程中是恒定的，测定它们在色谱图上的保留时间tR和峰高A后，可直接用tR定性，用峰面积A作为定量测定的参数，采用工作曲线法（即外标法）测定提取液中萘乙酸的含量。 三、仪器和试剂 1、Agilent 1100高效液相色谱仪。 2、色谱柱： Zorbax C8，5μm，250×4.6mm，20μL定样环。 3、流动相：H2O和CH3OH 4、萘乙酸标准溶液：准确称取1g，至10ml容量瓶中，加入甲醇溶解至刻度，摇匀，获得浓度为100mg/ml的对照品储备溶液，取对照品储备溶液用甲醇稀释，制成浓度分别为5、10、25、50、100mg/ml的对照品溶液，放入冰箱备用。 5、萘乙酸提取液样品处理：将植物样品洗净、切碎，于45 ?C烘干12 h。称取10g，加入50 mL甲醇超声提取30min。将残渣过滤，残留物用甲醇清洗2次。精确回收滤液，定容，备用。 6、平头微量注射器。 四、实验步骤 1、开机 ? (1) 检查流动相、废液瓶和色谱柱； (2)?打开打印机和计算机的电源； (3)?自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符）； (4) 打开工作站。 2、编辑方法 (1) 选择“Method”菜单，然后“EDIT METHOD”依屏幕提示进入以下设定： (a） 泵对话框：设定泵的流速：1.0mL/min；H2O:CH3OH=16%:84% ????? (b）检测器对话框：设定波长250 nm。 (2) 单击“Method”菜单，选中“Save Method As…”，输入方法名，单击OK。 (3) 从“Run Control”菜单中选择“Sample Info…”选项，输入操作者名称，在“Data file”中选择“Manual”或“Prefix”。 (4) 单击Ok，等仪器Ready，基线平稳。 3、进样 ????? (1）用样品洗注射器； ????? (2）先进标准样品，绘制标准曲线； ????? (3）再进栀子根提取液，测定含量。 4、分析结束，打印结果报告。 5、关闭检测器。 6、如果使用缓冲溶液，则先用90%水清洗色谱系统30分钟以上，再用甲醇清洗30分钟以上。 7、退出工作站，关闭“CAG Boot Up Server”。 8、 依次关闭主机，稳压电源，计算机和打印机。 五、结果处理 1、确定未知样中栀子苷的出峰时间。 2、绘制标准曲线。 3、求样品中栀子苷的浓度。 六、思考题 1、用标准曲线法定量的优缺点是什么？ 2、高效液相色谱柱一般可在室温进行分离，而气相色谱柱则必须恒温，为什么？高效液相色谱柱有时也实行恒温，这又为什么？ 实验1 气相色谱定性分析 一、实验目的 1、了解气相色谱仪的基本结构和工作原理。 2、学习和熟悉气相色谱仪的基本操作。 3、了解氢火焰离子化检测器和电子俘获检测器的原理和特点。 二、实验原理 各种物质在一定的色谱条件（固定相与操作条件等）下有各自确定的保留值，因此保留值可作为一种定性指标。对于简单的多组分混合物，若其中所有待测组分均为已知且它们的色谱峰均能分开，则可将各个色谱峰的保留值与各相应的标准试样在同一条件下所得的保留值进行对照比较，就能确定各色谱峰所代表的物质，这就是纯物质对照法定性的原理。该法是气相色谱分析中最常用的一种定性方法。以保留时间作为定性指标，虽然简便，但由于保留时间的测定受载气流速等色谱操作条件的影响较大，可靠性较差；若采用仅与柱温和固定相种类有关而不受其他操作条件影响的相对保留值ris作为指标，则更适合用于色谱定性分析。相对保留值ris定义为： 式中分别为死时间，被测组分?i及标准物质s的调整保留时间；为被测组分i及标准物质s的保留时间。 氢火焰离子化检测器（FID）是典型的破坏性、质量型检测器，是以氢气和空气燃烧生成的火焰为能源，当有机化合物