显微镜的使用及细胞的革兰氏染色..docxVIP

微生物实验报告——显微镜的使用及细胞的革兰氏染色摘要关键词实验目的 普通显微镜的基本原理简单染色的原理革兰氏染色的基本原理实验原理实验器材实验内容显微镜的构造及其使用简单染色革兰氏染色平板划线法实验结果参考文献报告编写人：张行润显微镜的使用及细胞的革兰氏染色山东大学生命科学学院09级四班张行润200900140177摘要显微镜的使用在我们学习微生物等课程中非常重要，历史上显微镜的发明和显微镜的每一次创新都给人类的认知带来了飞跃式的发展；给人类的生活带来了空前的拓展。在提倡科技创新的今天，显微镜的使用已经成为我们的一项基本技能。为了研究细菌的形态，微生物学家发明了对细菌的染色，用两种以上的称复染，革兰氏发明了复染色法；先后用两种染色剂和媒染剂、脱色剂组合，由此而命名为革兰氏染色。革兰氏染色不仅可以观察细菌的形态，同时将细菌分为两大类。一类是染色阳性菌是紫色，另一类染色阴性的是红色。由于细菌的结构上的差异，形成了不同的染色效果。了解染色性能有助于临床用药和细菌的鉴定。关键词显微镜的使用（Use of Microscope）革兰氏染色（Gram stain）复染（counterstain） 媒染（mordant dyeing） 脱色（discoloration）一、实验目的显微镜的构造及使用学习涂片、染色等基本技术初步认识细菌形态掌握革兰氏染色法实验原理A、普通显微镜的基本原理1、基本原理显微镜的放大效能（分辨率）是由所用光波长短和物镜数值口径决定，缩短使用的光波波长或增加数值口径可以提高分辨率，可见光的光波幅度比较窄，紫外光波长短可以提高分辨率，但不能用肉眼直接观察。所以利用减小光波长来提高光学显微镜分辨率是有限的，提高数值口径是提高分辨率的理想措施。要增加数值口径，可以提高介质折射率，当空气为介质时折射率为1，而香柏油的折射率为1.51，和载片玻璃的折射率（1.52）相近，这样光线可以不发生折射而直接通过载片、香柏油进入物镜，从而提高分辨率。显微镜总的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积，而物镜的放大倍数越高，分辨率越高。2、油镜微生物学使用的显微镜的物镜通常有低倍镜（10×）、高倍镜（40×）和油镜（100×），油镜是三者中放大倍数最大的，油镜的焦距和工作距离最短，油镜与其他物镜不同的是载玻片与物镜之间隔的不是一层空气（干燥系）， 而是一层油脂，称为“油浸系”。利用油镜的目的是增加显微镜的分辨力。B、简单染色的原理利用单一染料对菌体进行染色的方法叫做简单染色。常用碱性染料进行简单染色，这是因为在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。常用作简单染色的染料有美蓝、结晶紫、碱性复红等。当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色。染色前必须固定细菌。其目的有二：一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上；二是增加其对染料的亲和力。常用的有加热和化学固定两种方法。固定时尽量维持细胞原有的形态。C、革兰氏染色的基本原理经此法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌；细胞中初染剂被脱色剂洗脱而染上复染剂的颜色（红色）的细菌为革兰氏阴性菌。G+ G-1）G＋菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。2）Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄复染后呈红色。三、实验器材菌种：金黄色葡萄球菌（G+）、大肠杆菌（G-）、枯草芽孢杆菌以及自选菌种溶液和试剂：结晶紫、番红等各种染料以及碘液、酒精等香柏油、二甲苯等仪器及其它用品：普通光学显微镜、擦镜纸、绸布、酒精灯、载玻片、接种针、培养皿等四、实验内容显微镜的构造及其使用显微镜的基本结构实物图 结构图现代普通光学显微镜由机械系统和光学系统两大部分组成。机械系统主要包括：镜座、镜臂、载物台、转换器、调节装置等组成。光学系统主要包括：物镜、目镜、聚光器、光源等组成。显微镜的使用方法1、安放右手握住镜臂，左手托住镜座，使镜体保持直立。桌面要清洁、平稳，要选择临窗或光线充足的地方。单筒的一般放在左侧，距离桌边3～4厘米处。2、低倍镜观察先将低倍物镜的位置固定好，然后放置标本片，转动反光镜，调好光线，将物镜提高，向下调至看到标本，再用细调对准焦距进行观察。除少数显微镜外，聚光镜的位置都要放在最高点。如果视野中出现外界物体的图像，可以将聚光镜稍微下降，图像就可以消失。聚光镜下的虹彩光圈应调到适当的大小，以控制射入