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小鼠免疫程序 admin 一、抗原的准备1、收到抗原时，首先要了解抗原的种类、性质和浓度，以便采取不同的处理方法。2、多肽抗原，一般分多肽—偶联KLH和多肽—偶联BSA（或GGG）或裸多肽三种。多肽—偶联KLH一般用于免疫，而多肽—偶联BSA或裸肽一般用于检测，在免疫时注意区分使用。3、分装（1）收到抗原后，应及时按免疫需要分装，避免反复冻融。（2）如抗原是大肠杆菌重组蛋白，可能存在不溶性沉淀，分装前，应用超声粉碎仪粉碎，要注意，在冰浴中进行，超声强度应以溶液不产生泡沫的水平为准，超声强度过大，易产生泡沫导致蛋白变性，超声强度太低效果不佳，每次2-3秒，重复3-4次，超声完毕立即分装。（3）分装管应用不粘附蛋白的样品管，要用二种不同颜色的标签明确区分免疫用抗原和检测用抗原，并写明分装日期，抗原名，浓度和剂量。A 免疫用抗原：一般50ug/每只小鼠×5只=250ug/1个分装管，备做首次免疫用。另分装2个100ug/1管，备做融合前加强免疫用，再分装25ug/只/×5=125ug/1个分装管，共分装4-5管，备加强免疫用。B 检测用抗原：100ug/每管，分装共3管。C 分装好的抗原除马上免疫用管外，其余均装入小塑料袋中，写好抗原名标签，马上存入-700C。剩余抗原交保管员存-700C，并填好交接班表格。二、免疫程序1、多肽类抗原（包括MAP型多肽），第一次用福氏完全佐剂，每只50-100ug ,腹腔注射，总剂量0.5ml/只，第二次起用福氏不完全佐剂，剂量为25-50ug/0.5ml/只，间隔3周，第三次注射后10天测血（ELISA法），如滴度未达到1:104, OD1.0以上，则继续免疫，如ELISA已达滴度，则可取血清送WB或ICC检测。2、蛋白类抗原：所用抗原的剂量等与多肽类相同，但进程有差异，首次免疫21天后，第二次免疫后，每次间隔为10天。三、抗原的乳化抗原乳化前，应检查抗原管有否颗粒状沉淀，如有沉淀，应超声粉碎后，立即溶解在0.01M PH7.2 PBS中（PBS应为无菌液），每只小鼠腹腔注射总量0.5ml，用2-5ml注射器，取1.25ml含抗原的PBS，另一支注射器取（等体积）福氏完全佐剂或不完全佐剂，用不锈钢连接接头连接，反复推拉混合约10-30分钟，平放静置30分钟，如水乳相不再分离，即可注射小鼠。 将抗原蛋白溶于生理盐水中（可以溶解为0.2mg/mL的抗原溶液）；2. 与等体积的弗氏完全佐剂双推法混匀（此时抗原浓度约0.1mg/mL）；3. 经腹部皮下多点注射免疫BALB/C小鼠(注射约0.25mL)；4. 2周后用等量抗原与不完全弗氏佐剂同上法混匀后免疫；5. 再过1周后连续每周用以上4.的方法加强免疫1次(抗原可减半)，共3次；6. 最后一次免疫3d后，可通过断尾取血测血清效价，若达到预期目的，即可放血收集抗血清。这是一般常用程序，最佳程序与你所用的抗原类型、免疫方法、佐剂类型等有关，需要通过实验确定 点击次数：449 发布时间：2012-3-19 制备好抗原后，就要进行动物免疫了，免疫这一步除了动物自身的因素外，实验者也要有良好的计划才能得到更好的免疫效果。这里就几个常见的问题作一下简单的讨论。?动物的选择。常见的可以用来制备抗体的动物有：小鼠（Mouse）、大鼠（Rat）、豚鼠（Guinea pig）、仓鼠（Hamster）、兔（Rabbit）、绵羊（Sheep）、山羊（Goat）、马（Horse）、驴（Donkey）、奶牛（Cow），还有的还用鸡或者鸭的。选择动物无非就是考虑两个问题，第一个问题是能否具有较好的免疫效果。特别是对于抗原是蛋白质的情况，为了保证免疫成功，就要求宿主动物与抗原来源物种之间需要有较远的亲缘关系，如果不太确定亲缘关系的远近，可以把抗原的序列与被免疫的动物相应的蛋白的序列进行一个对比，优先选择同源性较低的物种进行免疫。选择动物的第二个问题是抗血清产量的问题，其实很多情况下需要的血清量就很大程度上限制了选择余地。根据实验目的不同，抗血清的用量也有所不同。比如说只想做几次Western Blot只需要一点点血清就够了，此时就可以选用小鼠这样的小动物，而如果想生产二抗作为商业使用，则可选用羊、驴、马这样的大型动物，大型动物还可以进行多次放血，以提高动物的利用率。这里列几种常见的物种以及它们的血清产量： 物种 抗血清产量（含血液中其它成份） 小鼠 每次可采0.1-0.2ml，每月可采两次。也可以一次放血，产量约为1-1.5ml。 豚鼠 每次可采1-2ml，每月可采两次。也可以一次放血，产量约为10-15ml。 兔 每次可采20ml，每月可采两次。也可以一次放血，产量约为100ml。 山羊 每次可采血800ml，每月可采两至三次