致病基因 9种常见致病军团菌基因芯片检测方法的建立_图文.doc

致病基因 9种常见致病军团菌基因芯片检测方法的建立_图文 导读：就爱阅读网友为您分享以下“9种常见致病军团菌基因芯片检测方法的建立_图文”的资讯，希望对您有所帮助，感谢您对92的支持! 第三章结果与分析 第三节芯片性能评价 ３．３．１特异性 基因芯片的特异性关键在于探针的特异性，而探针的特异性是指一条探针只能与目的检测菌株的靶基因之间发生碱基互补配对形成稳定复合物，而与非检测菌株间则不产生复合物或产生不稳定的复合物。所以，为了使所建立的基因芯片检测体系准确，就要充分保证探针的特异性，一方面通过选取特异的靶基因以及选取靶基因的高特异区域作为靶点设计探针，另一方面需要通过大量的近缘菌株与芯片进行杂交来验证实际中探针的特异性情况。 通过完成的６１例特异性实验，检测内容包括本芯片检测范围内、外的细菌共１８个属，３４个种的６１株菌（表２．２）。其中，检测范围内的菌株杂交结果除本身的特异探针和荧光探针、正对照探针结果呈阳性外，其他探针均未出现非特异性杂交（图３．１）；在检测范围外的菌株除荧光探针、正对照探针外，其他探针杂交结果均为阴性，证明本芯片的特异性探针能准确区分出不同种的军团菌，具有好的有效性。以Ｌ．ｓｔｅｉｇｅｒｗａｌｔｉｉ军团菌的杂交结果为代表说明阴性结果（图３．２），从图中可以看出，只有荧光探针和正对照探针有杂交信号，其他探针均无信号。 图３．２Ｌ．ｓｔｅｉｇｅｒｗａｌｔｉｉ军团菌芯片杂交结果 ３．３．２灵敏性 对基因芯片灵敏性的评价，我们采用基因组ＤＮ．Ａ和Ｉ纯菌进行了灵敏度试验，分别确定了芯片检测对ＤＮＡ和菌浓的最低要求。 ３．３．２．１ＤＮＡ灵敏度 第三章结果与分析 选取嗜肺军团菌和波兹曼军团菌为代表菌株对基因芯片的ＤＮＡ灵敏度进行评价。采用２．２．７．２中（１）的方法对样品进行处理后，分别用芯片检测，杂交结果显示：嗜肺军团菌的ＤＮＡ灵敏度是Ｏ．０１ｎｇ，波兹曼军团菌是０．１ｎｇ，因此我们确定该基因芯片在基因组ＤＮＡ水平上的灵敏度为０．１ｎｇ。下图３．３和图３．４是两个代表菌株的ＤＮＡ灵敏度的杂交结果。 ＡＢＣ ＤＥＦ 图３．３嗜肺军团菌ＤＮＡ灵敏度 Ａ，１００ｎｇＤＮＡＢ，１０ｎｇＤＮＡ；Ｃ，１ｎｇＤＮＡ；Ｄ， ０．１ｎｇＤＮＡＥ，０．０１ｎｇＤＮＡ；Ｆ，０．００１ｎｇＤＮＡ