糖皮质激素泼尼松的定测定.docVIP

糖皮质激素泼尼松的测定，泼尼松龙，?地塞米松，并且使用液体皮质醇在人血清?”被要求是在其标称值的15％。例如，使用八个标准来定义一个工作时曲线，六被要求落入目标的15％的浓度。否则，重复整个分析。校准标准注射一次，并且随机整个分批注射。 对于每个分析，在内部和精密天之间通过测试每六个复制样本确定5个不同天的控制浓度。四控制浓度被使用。在五天，有总在每一浓度进行分析30个样品的。 对于每个分析物，最低的对照样品浓度为准备成为LOQ小于三倍。该分析被认为是有效的，至少三分之二的样品的在每个控制浓度必须是内15％目标值。对照样品也随机遍布每个样品批次。 2.7 最低限度的定量和检测限 为定义的分析物的浓度可重复性在15%的确定目标值和信噪比至少为五。确定每个分析物在LOQ为六等分。认为可以接受的检测，所有样品被要求在15%的目标内产生一个结果价值。公认的LOQ浓度采用作为日常工作曲线的最低标准分析。 实验确定的检测限作为分析物浓度，产生了一个信号是三倍的噪声电平的空白准备。这个通过添加的检测限的检测依次降低分析物浓度的血清和分析样本的获得皮质醇的点信号噪声级三。地塞米松，泼尼松和强尼松龙，分别计算检出限从色谱图。 2.8 独立的精度和精度矩阵 独立评估方法的准确性血清来源泼尼松龙和地塞米松，强的松，被添加到每个五个独立的血清（谷生物医学），导致增加了4-5倍大于该LOQ。未经治疗的血清内源性皮质醇的清除。三制剂每一个血清进行分析和评估的精度和精度与附加浓度。为了比较每个矩阵的空白也进行了分析。 购买多发性血清治疗是很昂贵的对于去除皮质醇的行为进行相同的实验多发血清中皮质醇的测定。此外，未经处理的血清皮质醇水平在工作曲线范围。或者，开发方法被用来重新分析含有的临床样本从先前的研究中皮质醇。为既往临床研究，样品进行了分析，使用验证的正常高效液相色谱法，与定量下限在10纳克/毫升[ 8 ]。样品存放在?70℃为4年过渡期。 2.9 稳定性 样品经过三次反复冻融的稳定性周期被确定以评估分析物的完整性在重新分析。对照样品进行分析解冻后，和相同的样品相比冻融三次。在每次解冻，使样品在室温下坐至少4小时，然后再冷冻12小时。六个复制每四个对照样品用于比较。 在某些情况下，制备的样品被重新注入到LC/ MS / MS系统进行重复注射整批。如果仪器发生故障应在发生这可能发生分析一批样品的。为了确定样本坐在自动进样器托盘后的稳定性过夜，一组标准和对照制备。样品进行分析一次，静置在自动进样器24小时，然后进行分析第二次。结果第一分析进行比较，所述第二分析稳定性测定。 结果和讨论 3.1 对MS / MS检测参数的优化 用于优化检测和碎片仪器设置，每一个物种直接注入的质量光谱仪。结果如表1所示。比较的正和负的电离模式表示负电离产生了更好的信号-噪声比和减少碎片。这是与文献[18,21]来。碰撞诱导解离含氮气体产生的碎片，有三十个质量单位低于前体离子。这与一[我–H–CH2O ]?片段。串联质谱法的应用用于分析物的定量增强选择性的方法。在发达的色谱方法，强的松龙和皮质醇的共洗脱，用一二原子质量单位前体和碎片离子的差异。确定如果这两者之间有任何干扰被分析物，每个化合物被单独注射在浓度五至十倍的上限工作曲线。泼尼松龙，高峰皮质醇是发现生产一个信号的三十倍，不那么强烈的峰值强的松龙（参见图2a）。此高度为皮质醇低于皮质醇的日常工作中最低标准的高度曲线。皮质醇，无强干扰被发现（见图2b）。此外，由于三的物种是六原子质量单位内（皮质醇，强的松，强的松龙），经常监测仪器的质量分辨率在验证和病人样本分析，没有在常规校准显著漂移（每1–2周）。 3.2 LC/ MS / MS色谱特性 所选择的条件导致在四个药物的溶出在6分钟的物种和内标（参见图3a和b）中。由此可以看出，在图图3a，这两个峰获得对于泼尼松龙的前体/片段过渡;该小峰共同洗脱强的松。这个信号是呈现为含泼尼松标准，而实际上这个信号增加和减少各自泼尼松浓度。此外，没有检测到该峰值当单独泼尼松龙被注入（图2a），但存在于5克/毫升泼尼松溶液（图2c）。因此，我们得出结论，该峰是可能的污染物购买强的松固体用于制备我们的标准和质量控制的解决方案。虽然这个信号是小够不干扰定量，其分辨率从泼尼松龙演示耦合的优点分离组件到质谱仪。 它应当指出，该信号未在患者中观察到样品。 固相萃取（SPE）用于样品制备，因为产生的提取物没有干扰在开发过程中定量。出版 文献还介绍了建立使用的液-液从血清和血浆中提取糖皮质激素[ 8,17 ]。然而，所使用的溶剂（氯乙酸，乙酸乙酯，正己烷）在处理过程中往往是苛刻且昂贵的。在较小程度上，上线微萃取已用于这些药物的尿液分析[ 13 ]。自动化提取技术是有吸引力的制备时间。然而，它是