[细胞衰老与凋亡2.pptVIP

（四）诱导细胞凋亡的因子 ◆物理性因子： 包括射线（紫外线，? 射线等），较温和的温度刺激（如热激，冷激）等。 ◆化学及生物因子： 包括活性氧基团和分子，DNA 和蛋白质合成的抑制剂，激素，细胞生长因子，肿瘤坏死因子 ?（TNF?），抗 Fas/Apo-1/CD95抗体等。 （五）细胞凋亡的检测 ◆形态学观测：染色法、透射和扫描电镜观察。 ◆DNA电泳：DNA片段呈现出梯状条带。 ◆TUNEL测定法：即DNA断裂的原位末端标记法。 TUNEL是指末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法。此法 可对凋亡细胞的核DNA中产生的3’-OH断裂缺口进行原位标记。 ◆彗星电泳法（comet assay）：又叫单细胞电泳技术和微凝胶电泳。 用以检测单个细胞中的DNA断裂。细胞凋亡中 DNA ladder 的出现被认为是细胞群发生凋亡的主要标志。细胞在凋亡过程中会有不同的DNA片段化程度，在电场中泳动速度较快，呈现出一种彗星式的图案。正常的无DNA断裂，在电场中泳动速度较慢，呈圆球形。 ◆流式细胞分析：细胞凋亡中 DNA断裂，用碘化丙锭使DNA产生激发荧光。 ●在细胞凋亡一词出现之前，胚胎学家已观察到动物发育过程中存在着细胞程序性死亡（programmed cell death，PCD）现象，它是胚胎正常发育所必需的。近年来PCD和细胞凋亡常被做为同义词使用，但两者实质上是有差异的。 ----首先，PCD是一个功能性概念，描述在一个多细胞生物体中，某些细胞的死亡是个体发育中一个预定的，并受到严格控制的正常组成部分，而凋亡是一个形态学概念，指与细胞坏死不同的受到基因控制的细胞死亡形式； -----其次，PCD的最终结果是细胞凋亡，但细胞凋亡并非都是程序化的。 2002年10月7日英国人悉尼·布雷诺尔、美国人罗伯特·霍维茨和英国人约翰·苏尔斯顿，因在细胞程序性死亡方面的研究获诺贝尔诺贝尔生理与医学奖。 Sydney Brenner 三、细胞凋亡的分子调控机理 （一）Caspase 家族与凋亡 1、Caspase家族 Caspase属于半胱氨酸蛋白酶，相当于线虫中的ced-3，这些蛋白酶是引起细胞凋亡的关键酶，一旦被信号途径激活，能将细胞内的蛋白质降解，使细胞不可逆的走向死亡。它们均有以下特点： ①酶活性依赖于半胱氨酸残基的亲核性； ②裂解靶蛋白位点是天冬氨酸残基后的肽键，所以命名为caspase（ Cysteine aspartic acic specific protease ），方便起见称之为凋亡酶； ③都是由两大、两小亚基组成的异四聚体，大、小亚基由同一基因编码，前体被切割后产生两个活性亚基。 线虫(C.elegans)凋亡研究发现ced3，ced4基因促进细胞凋亡，ced9基因阻止ced3/ced4的激活，抑制细胞凋亡。Ced3哺乳类同源物是ICE，即Caspase1。 ICE蛋白酶参与 Fas 诱导的细胞凋亡，与线虫细胞凋亡基因 ced-3 同源。 ced-4 在哺乳动物中的同源体为Apaf-1 (apoptotic protease activating factor-1)，能激活Caspase3 ，这一过程需要细胞色素c（Apaf-2）和Apaf-3的参与。 * * 诺 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. IBRV SBV Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011