活性评价试验例析.pptVIP

下载本文档

3
0
约 11页
2017-01-08 发布于湖北
举报
版权申诉

活性评价试验例析.ppt

1、有哪些信誉好的足球投注网站（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

活性评价实验天然产物实验室活性评价室 2012-4-24 实验内容 Western Blot Real-time PCR * 一、Western Blot 二、Real-Time PCR 实验器材：电泳转膜电源、电泳仪转膜仪、摇床、红光、暗室、移液枪、辅助玻璃仪器若干试剂:(操作过程中介绍) 1、试剂准备 6、转膜 2、样品收集 7、封闭 3、配胶 8、一抗、二抗孵育 4、上样 9、洗涤 5、电泳 10、发光鉴定实验步骤：实验结果处理： 1.0117593 1.006521 1.003128 　 150707792 149927514 149422116 148956177 扫描胶片成图片文件，BandScan分析条带灰度值，确定蛋白含量变化。实验器材：普通PCR、Real-time PCR、电脑、 Real-time PCR配套软件、各移液枪、EP管及其他辅助器材试剂： RNA提取试剂、RNA反转录试剂、 Real-time PCR试剂实验步骤： 1、细胞培养，药物处理 2、RNA提取 3、RNA反转录 4、 Real-time PCR Real-time PCR体系 SYBgreen 12.5μl 上游引物 0.25μl 下游引物 0.25μl cDNA 1~2μl H2O 6μl （内参及目的基因）例如： Sample 处理前处理后 Bax(MeanCt) GAPDH(MeanCt) E 18 16 17 17.4 1.95 1.95 2 - △△Ct法：假设目的基因和参照基因扩增效率都接近100% △Ct（处理后）＝16－17.4=－1.4 △Ct（处理前）＝18－17＝1 △△Ct=△Ct（处理后）－△Ct（处理前）＝－1.4－1＝－2.4 比率（处理后/处理前）=2－△△Ct＝2－（－2.4） = 5.3 所以Bax基因在处理后表达水平是处理前的5.3倍相对定量分析——2 -△△Ct法 F = 2 －待测组目的基因平均Ct值待测组内参基因平均Ct值对照组目的基因平均Ct值对照组内参基因平均Ct值－－－公式： *