生化实验指导生化实验指导.doc

生物化学实验指导 成都中医药大学生化教研室编 二00六年三月 目录 实验须知 实验一 基本操作技术 实验二 蛋白质的沉淀反应 实验三 蛋白质的等电点 实验四 核糖核酸的提取及成分鉴定 实验五 影响酶的作用的因素 实验六 麦芽淀粉酶的提取和鉴定 实验七 分光分析法 实验八 维生素C的定量测定（碘滴定法） 实验九 饱食、饥饿对肝糖原含量的影响 实验十 血糖的测定 实验十一 胰岛素和肾上腺对血糖浓度的影响 实验十二 剧烈运动对尿中乳酸含量的影响 实验十三 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 实验十四 脂肪酸的β-氧化与酮体的生成和利用 实验十五 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 实验十六 血清谷丙转氨酶活性的测定 实验十七 血浆CO2结合力测定 实验十八 茯苓多糖、猪苓多糖的水解和鉴定 实验十九 标准曲线及回收实验（以血糖的测定为例） 实验二十 氨基酸的薄层层析法 实验二十一 胡萝卜素的柱层析分离法 附录 试剂配制 实验须知 一、实验目的 1.培养研究自然科学的正确态度和思维方法，提高分析问题和解决问题的能力。 2.学习生物化学的基本技术操作和方法 3.通过实验验证某些基本理论，以巩固和加深对基本理论的理解。 二、实验前的准备 学生在实验前必须按教学计划进行预习: 1.复习有关理论 2.明确实验目的 3.熟悉实验中的主要步骤 4.判断实验预期结果 预习是做好实验的关键，事先做好必要的预习才能主动思考和独立操作，并且获得良好的结果 三、实验时注意事项 1.实验时必须严肃认真、一丝不苟，按照操作规程，细心的独立地进行操作，仔细地观察和综合分析所出现的现象和结果，客观地有条理地及时地记录实验记录本内 2.实验室一切器材设备应加以爱护，使用试剂、水、电、火柴、酒精、蒸馏水、肥皂等消耗品时应注意节约，避免浪费。使用仪器如生疏，或以前未曾用过，应先请教带习教师指导。玻璃器皿使用时，既要大胆、又要小心谨慎，稳拿轻放，尽量避免损坏。如有损坏应立即报告带习教师，并说明损坏原因，以便吸取经验教训。凡能阻塞下水管之废品，如用过的滤纸，火柴梗以及沉淀物等，或浓酸、浓碱，均须倾倒入实验室内的废物缸中，勿倾入水槽中，以免将其阻塞和损坏。 3.实验室应严格保持肃静，随时注意整齐清洁，公用仪器及试剂瓶，未经带习教师允许，不得随意搬运。 四、实验后的注意事项 1.实验完毕后,即将所用仪器清涤清洁,妥善放置柜内,下次实验时即有清洁干燥的仪器可用,临时借用的仪器,洗涤清洁后放于实验台上。 2.如有玻璃器皿损坏,须填写“报损单”,经指导教师签字后,到准备室换取。 3.离开实验室时,应将实验室整理清洁,并检查水、电、窗户是否关好。 五、实验报告 每次实验完毕,须及时整理实验记录,依照规定格式写出实验报告，交指导教师评阅。 实验一 基本操作技术 一、常用仪器的使用 1.吸量管的使用:生化实验中常用的吸量管有三种: (1)刻度吸量管：刻度吸量管有刻度到尖端的及不刻到尖端的两种,使用前仔细分清。使用不刻到尖端者,将尖端轻触受器的内壁，让液体自然流出，不得吹出尖端的液体；如使用刻到尖端者，放出液体后，应吹出最后留在管内的少量液体。 (2)移液吸量管：将所量取的液体放出后,不得吹出尖端的液体。 (3)奥氏吸量管：准确度最大,使用时必须吹出留在尖端的液体。 在使用上述任何一种吸量管时均用食指堵盖吸量管上孔,当自液体中取出后均须将管之外壁用滤纸擦干,放出所需要液体时均须使吸量管尖端轻触吸受器之壁。 取上述吸量管各一支，从杯子中取各种体积(1毫升，2.5毫升，4.6毫升……等等)的水移入一量筒,再由量筒吸入杯中,如此反复数次,直至比较熟练。 2.量瓶的使用：量瓶亦为准确的定量仪器，瓶颈上有一刻度及二刻度者二种，二刻度者可作移液用，但移液时以上面刻度为准。 用吸量管准确吸取CuSO4溶液１毫升（应用何种吸量管？）置于100毫升量瓶内，加水到刻度，然后塞紧瓶塞，上下多次倾倒摆动，多次混匀。 3.量筒的使用：量取液体时，如准确度要求不严格，可用量筒。 4.离心管的使用：离心管是一端封闭，上下口径不等，即下端缩小的玻璃管或塑料管，其口径和长短有不同的尺寸，有些具有刻度。 离心管用于进行小量沉淀反应（半微量分析），沉淀生成后，将管放在离心机中离心分离，因为沉淀聚集在管的下端便于观察，也便于将沉淀与溶液分开，离心管不能直接用火加热，如须加热只能在水浴中进行。 5.锥形瓶（三角瓶）的使用：锥形瓶常用的有125毫升、250毫升、500毫升及1000毫升等，它可以盛受液体不易溅出，也用于加热，滴定等操作中。 6.滴定管的使用：滴定管是一种较厚的玻璃管，外壁有刻度，表示毫升容积，有玻璃滴定管与橡皮头滴定管。 （1）玻璃