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成绩评定 教师签名 湖北工业大学本科课程期中考核 考核形式：课程论文 课程名称： DNA重组技术概论 学院： 轻工学院 专业： 生物工程 班级： 10生工2班 学号： 1010511222 姓名： 张杰 指导教师： 杨波 目录 摘要：…………………………………………………………3 前言：…………………………………………………………3 1.1 DNA重组技术的概述………………………………......3 1.2 DNA重组技术原理………………………………….....4 1.3 DNA重组技术相关概念………………………………..4 1.4 DNA重组技术中的工具酶……………………………..5 1.5 DNA重组技术步骤………………………………….....5 2 DNA重组技术的应用…………………………………..7 2.1 DNA重组技术在药学方面的应用………………………重组DNA技术在医药中的应用…………………………………………………....8 3.1 DNA重组产品与人类健康……………………………..8 3.2 DNA重组产品与农业生产……………………………..8 3.3 DNA重组产品与生态平衡……………………………..8 结语………………………………………………………….. 9 参考文献………………………………………………………9 摘要 DNA重组技术就是采用人工手段将不同来源的DNA片段（含某种特定基因）进行重组，以达到改变生物基因型和获得特因产物的目的的一种生物高技术。70年代中后期由于出现了工程菌以及实现DNA重组和后处理都有工程化的性质，故基因工程或遗传工程作为DNA重组技术的代名词被广泛使用。80年代初，由于基因工程需重组DNA多拷贝复制，建立无性系，故“分子克隆”又被用作DNA重组技术的另一个代名词。在目前，基因工程还包括基因组的改造、核酸序列分析、分子进化分析、分子免疫学、基因克隆、基因诊断和基因治疗等等内容。可以说，DNA重组技术创立20多年来所获得的丰硕成果已经把人们带进了一个不可思议的梦幻科学世界，它给了人类打开生命奥秘和防病治病“魔盒”的钥匙，它为工业提供了光辉灿烂的奖品，它使农业从肥料和杀虫剂的束缚中解放出来，它还给世界一个清新的生态环境。(1)载体和目的基因的分离(分):对载体DNA和目的基因分别进行分离纯化.目的基因的获取:常用化学合成法、基因组DNA文库、cDNA文库、聚合酶链反应.载体:质粒、噬菌体和病毒三大类载体均经人工构建,除去致病基因,有筛选的标志、单一的限制酶切点等.(2)载体和目的基因的切断(切):通常采用限制性核酸内切酶,分别对载体DNA和目的基因进行切断,以便于重组.(3)载体和目的基因的重组(接):即将带有切口的载体与所获得的目的基因连接起来,得到重新组合后的DNA分子.黏性末端连接法;平端连接;同聚物加尾连接;人工接头连接法等.(4)重组DNA的转化和扩增(转):将重组DNA导入宿主细胞进行增殖或表达.导入重组DNA分子的方法有转化、转染和感染等.受体细胞为细菌时,常采用电穿击法、热击法等重组DNA导入宿主细胞后,即可在适当的培养条件下进行培养以扩增宿主细胞.(5)重组DNA的筛选和鉴定(筛):对含有重组体的宿主细胞进行筛选并作鉴定.可根据重组体的表型、标志互补、DNA限制酶谱进行分析、核酸杂交法进行分析等方法鉴定.获得带目的基因的细菌后,可将其不断进行增殖,从而得到大量的目的基因片段用于分析研究.(6)克隆基因的表达:如在目的基因的上游带有启动子顺序,则目的基因还可转录表达合成蛋白质.(1) DNA克隆:是指采用人工方法将不同来源的DNA进行重组,并将重组后的DNA引入宿主细胞中进行增殖或表达的过程,DNA克隆又称基因克隆.(2)工具酶:在重组DNA技术即基因工程技术中需应用某些基本酶类进行基因操作,称为工具酶.包括如DNA聚合酶、DNA连接酶、末端转移酶、反转录酶、多聚核苷酸激酶,而限制性核酸内切酶特别重要,应用最广.(3)限制性内切核酸酶:常用的为类酶,其特点:识别DNA的特异序列并切割;不同的酶识别核苷酸序列往往包含4~6个核苷酸;不同的酶切割DNA频率不同;可产生黏性或钝性末端.(4)目的基因:是指在基因工程中分离、获得的某一感兴趣的基因