HCV 结构的介绍.docxVIP

Questions 1对HCV的初步理解1、其基因结构：HCV是正链RNA 病毒，传播的途径为血液传播。基因全长为9.6kb包括5-NCR、一个长的开放阅读框（0RF），编码组成约3000个氨基酸的多蛋白前体，和3-NCR.2、目前hcv研究的现状：患者多，治疗方法不彻底，再感染几率大，潜伏期长，大部分患者会造成慢性肝炎，肝硬化，肝癌等疾病。研究其感染机制，病毒与宿主细胞的相互作用，一方面能够为制出特异性药物提供思路，另一方面是研发有效疫苗的必经之路。目前病毒性肝炎的治疗多以聚二乙醇干扰素和利巴韦林，蛋白酶抑制剂联合用药，但是机体对干扰素应答的副作用大，再感染几率高。在研究方面HCV感染后血清中病毒含量极低，同时目前缺乏有效的体外培养系统及合适的动物模型繁殖病毒，无法获得大量的天然病毒抗原，目前只能通过合成肽或基因重组的方法，获得HCV包膜蛋白抗原。同时还缺乏有效的疫苗。3、感染后缺乏有效的免疫的可能原因（1）HCV高度变异，逃避机体的免疫清除；（2）HCV在肝组织及血液中含量低及诱导机体产生保护性的抗原性弱；（3）病毒颗粒与低密度脂蛋白或免疫球蛋白紧密联接，导致抗原决定簇被掩盖；（4）外周血淋巴细胞可能有HCV储存库的作用。4、研究点：对于以上问题决定我们研究HCV的方向为编码蛋白和宿主因子在HCV复制、组装过程中相互作用，治病机制、疫苗的开发等。Questions 2该病毒蛋白的结构和功能（功能机构，与宿主细胞相互作用，引发疾病）HCV的RNA及其翻译加工HCV含有9.6 kb的正链RNA基因组5-NCR，一个长的开放阅读框，编码组成约3000个氨基酸的多蛋白前体，和3-NCR..5-NCR高度保守，有1-4个域，域一不是IERS起始必须的，但是域一和二是RNA复制所必须的。每一个HCV都有一个IERS序列，是翻译起始必须的序列。3-NCR由一个80个核苷酸序列组成的多聚U的可变区和一个由98个核苷酸组成的X-尾巴的不变区组成。3-NCR是一个顺势作用原件，编码NS5B蛋白。在细胞培养和体内时3-NCR.和5-NCR都是必须的。5-NCR的域二，三，四和核心基因的20-40个核苷酸构成IRES序列。RNA的翻译起始：IERS序列和40S核糖体结合形成一个48S的二元复合物，然后在真核生物起始因子eLF3的帮助下与RNA上的AUG序列结合，形成eIF2?Met-tRNAi?GTP三元复合物，最后的限速步骤是依赖于GTP的与60S核糖体结合成80S的复合物。HCV的ORF翻译产生了蛋白前体是共翻译后通过细胞和病毒蛋白酶处理为成熟的结构与非结构蛋白。结构蛋白和p7多肽是由内质网处理（ER）信号肽酶处理而非结构蛋白由两种病毒NS2-3蛋白酶和NS3-4A丝氨酸蛋白酶处理。核心蛋白coreHCV的ORF翻译的第一个蛋白，其由功能区转入内质网腔的信号在内质网膜上C与E1之间。信号序列被信号肽酶裂解。最终成为分子量为21道尔顿的核心蛋白.其N端是高比例的碱性氨基酸，称为D1，可以使两个同源RNA聚合在一起。核心蛋白发现与内质网膜上的脂滴中，为高度螺旋蛋白。脂滴是一个相对疏水的环境，这不仅确保蛋白质的折叠还有利于病毒蛋白的复制，形态发生。核心蛋白与脂滴可能相互作用影响脂质代谢，促进肝脏的脂肪变性，这是经常出现在C型肝炎，特别是患者感染基因型3。包膜糖蛋白E1和E2。包膜蛋白E1和E2是糖基化形成的非共价复合物，给病毒形成一个保护囊。丙型肝炎病毒糖蛋白的成熟和折叠是一个复杂的过程，涉及ER机械伴侣和取决于二硫键形成以及糖基化。跨膜结构域E1和E2，位于其C末端的异源二聚体并具有ER滞留性能。都由两个可延伸的疏水性氨基酸通过短极性键连接。第二疏水片段为E2下游和p7中内部信号肽蛋白质。内信号序列断裂前，E1和E2的跨膜结构以发夹结构与易位子相连。信号肽裂解之后，信号序列被重新定位，偏向胞质溶胶，最终形成单一的跨膜通道。E1和E2的三维结构的测定将是为阐明由这些蛋白质介导受体结合和融合过程的关键。P7。P7是一个63个氨基酸的多肽与E2常不完全切割。它的两个跨膜通过一个的胞质环连接，并且N端和C端被定向向ER内腔。在体外， HCVRNA复制中p7不需要，但在体内生产性感染中必不可少。据报道，根据其低聚物和阳离子通道活性，这表明它属于的体内蛋白质家族，并在病毒颗粒的成熟和释放中有重要的作用。因此可用于对抗病毒药物干预。NS2-3蛋白酶。NS2-3蛋白酶也被称为该autoprotease，是丙型肝炎病毒难以研究的蛋白质之一。对于HCV在体RNA复制是可有可无的，但无论在体外还是体内其对复制的周期所必需的。NS2-3蛋白酶催化活性在NS2的C-末端半和NS3N端三分之一处。定点诱变表明，氨基酸His143，Glu163和Cys184是蛋白水解活性所必