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CTAB 十六烷基三甲基溴化铵 别称:西曲溴铵、溴棕三甲基铵、溴烷铵,鲸熔三甲基溴化铵;CTAB;CTMAB;HTAB;CTABr;阳性皂 英文名 Hexadecyl trimethyl ammonium Bromide;Cetrimonium Bromide 分类 季铵盐 ?? 分子式 C16H33(CH3)3NBr 分子量 364.446 熔点:250-237℃ 溶解性:13 g/L (20°C) 密度:1.3220 g/ml 提取DNA配方 CTAB为十六烷基三甲基溴化铵, CTAB提取缓冲液的经典配方 Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏; EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制DNase活性; NaCl 提供一个高盐环境,使DNP充分溶解,存在于液相中; Cβ-巯基乙醇是抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,使酚容易去除基因组DNA。 CTAB 4g NaCl 16.364 g 1M Tris-HCl 20ml( PH8.0) 0.5M EDTA 8ml,先用70ml ddH2O溶解, 再定容至200ml灭菌 冷却后0.2-1% 2-巯基乙醇(400ul)氯仿-异戊醇(24:1):先加96ml氯仿,再加4ml异戊醇,摇匀即可。 提取RNA配方 2% CTAB(W/V) 2% 聚乙烯吡咯烷酮PVP(W/V) 100 mM Tris-HCl(pH8.0,DEPC处理的水配置) 25mM EDTA 0.5g/L 亚精胺Spermidine 2.0M NaCl,2%巯基乙醇(V/V,使用前加入) 由于在高温灭菌条件下,Tris-HCl要和DEPC发生反应,所以配RNA提取缓冲液时直接用DEPC 处理的水配制即可。 CTAB法提取DNA CTAB提取缓冲液配方:1mM Tris-HCl ( PH8.0);20mM EDTA( PH8.0);1.4 M NaCl;2% CTAB(W/V);2% 聚乙烯吡咯烷酮PVP(W/V)。 (1)取材料(3片叶)移入1.5 ml Eppendorf管中,迅速加液氮研磨成粉末状; (2)加入600 μl的CTAB提取缓冲液(CTAB在65℃水浴预热),加3 μl β-巯基乙醇(0.2-1%),混匀,60-65℃水浴30min-1h。每5min轻轻摇动几次,开始可以颠倒,后期轻缓; (3)30min后,加入1/3V的5M KAc 混匀冰浴30min,4℃,12000 r/min,离心15 min; (4)小心吸取上清液,移入新的1.5 ml Eppendorf管中,加入等体积的冷冻 氯仿-异戊醇(24:1)氯仿-异戊醇(24:1)
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