Super007-004.1 人类ABO血型A亚型基因分型检测试剂盒(PCR-SSP法)说明书Super007-004.1 人类ABO血型A亚型基因分型检测试剂盒(PCR-SSP法)说明书.doc

天 津 市 秀 鹏 生 物 技 术 开 发 有 限 公 司 Tianjin Super Biotechnology Developing Co., Ltd 人类ABO血型－A亚型基因分型检测试剂盒 （PCR-SSP） 包装规格：4/8/20人份 产品代码：SUPER007-004-004 SUPER007-004-008 SUPER007-004-020 ★ 仅供研究，不用于临床诊断 【产品名称】 通用名称：人类ABO血型－A亚型基因分型检测试剂盒(PCR-SSP) 英文名称：Human ABO Bloodtype－A subgroup genotyping kit 【包装规格】 包装规格：4 / 8 /20人份 【预期用途和简介】 已知ABO血型系统中A亚型包括，A1、A2A3、Aw、Ax、Am Ael等。A1亚型具有A抗原，血清中含有抗B抗体；亚型只有A抗原，其血清中含抗B抗体，还有少量抗抗体。具有分型准确、快速、需求少等优点。可用于疑难血产前诊断、干细胞移植肿瘤血型。试剂盒通过对基因不同碱基的替换或缺失设计特异性引物，包括：AM、Ael O。包装规格 组份 人份 8人份 20人份 ABOA亚型引物板 2块板 4块板10块板 浓缩dNTP-Buffer(0μl/支) 2支 4支 10支 500?mM??KCl，100?mM??Tris-HCl，1%?Triton?X-100等，使用前用无菌去离子水稀释。 * 浓缩的dNTP-Buffer到货后，要根据每次的用量稀释后进行分装，不可反复冻融。 * 分装的浓缩Buffer在室温溶解后，其颜色应为粉红或浅紫色。如果浓缩Buffer溶解后的颜色不是指定的颜色，则不能使用。 * 如果在运输或储存中发现分装的浓缩Buffer中的盐已经沉淀了，要通过延长在室温（20-25℃）下的混匀时间来使其重新溶解。 操作过程中用到的其他设备及试剂： 10μl-1000μl的微量移液器和相应规格量筒； 涡旋混匀器； 低速离心机； 加热板或微波炉——加热琼脂糖凝胶溶液； 电泳电源)； 紫外光成像仪或紫外光凝胶成像系统压力垫(5units/μl)； 电泳染色剂； 1× TBE溶液； 琼脂糖（分子生物学级）； 液体石蜡（分析纯）。 【储存条件及有效期】 1．储存条件： a）-20℃保存，避免反复冻融。 b) 室温操作。 2．有效期： 12个月，生产日期及有效期见试剂盒外包装。 【适用仪器】 DNA扩增仪、水平电泳槽、紫外/凝胶成像仪 【样本要求】 提取人类基因组DNA。 DNA样品用1×TE(pH8.0)溶液溶解，DNA最佳浓度30-50ng/μl，A260/A280值为0.9-1.6。 DNA样品不可重新溶解在含有钙螯合剂的溶解液中，例如大于0.5 mM浓度的EDTA。 DNA模板在4 ℃或-20 ℃保存，4 ℃以下运输。 【电泳操作方法】 一、2.5%琼脂糖凝胶的配制: 2.5g琼脂糖加入100ml 0.5×TBE（硼酸缓冲液），加热溶解后加入适量电泳染色剂，混匀。 将适量凝胶溶液加入凝胶槽槽中，插入孔梳，前后水平移动均匀溶液，凝固 96℃/2 min 1 cycle 2 96℃/20 sec，68℃/60 sec 5 cycles 3 96℃/20 sec， 65℃/45 sec，72℃/30 sec 10 cycles 4 96℃/20 sec， 62℃/45 sec，72℃/30 sec 15 cycles 5 72℃/1 min 1 cycle 6 4℃ ∽ 三、必须满足的试验条件： 从－20℃冷冻室取出Taq聚合酶，放置冰上使用。 冷冻引物板放置室温解冻后立即使用。 四、实验过程中的注意事项： PCR前后使用的加样器具要分开，不得混用。 所有检样均应按照潜在的传染物处理。 当观察和拍摄胶凝体 名称 体积 备注 dNTPs-Buffer 460μl Taq酶（5U） 3.6μl DNA 50μl 合计 513.6μl 混匀，每孔10ul，石蜡油15-20μl 每孔10μl，石蜡油15-20μl。 *操作中需严格避免间的交互污染轻轻地，。PCR产物10μl置2.5%琼脂糖凝胶电泳/120-150V电泳15-20分钟。 紫外光下观察结果并拍摄成像。 根据提供的结果分型表（附二）解释分型结果。 六、质量控制程序： 阴性扩增反应必须出现阳性内参质控带；阳性扩增反应的内参质控带可能会很弱或者不存在，这是因为特异性引物扩增过程中与内参引物竞争Taq酶等反应原料的结果。 七、实验结果模拟判读图： 胶体解释