硕士研究生分子生物学考试内容.doc

硕士研究生分子生物学考试内容 大肠杆菌细胞在15N培养基（重培养基）中培养数代，产生含重氮（15N）的大分子（包括15N-DNA分子），而后移到正常培养基（14N）上培养，在不同时间提取DNA样品并在CsCl溶液中超速离心。Cscl溶液在超速离心下形成密度梯度。DNA分子在该密度梯度中迁移，并在与其密度与溶液密度相同点达平衡 结果表明，DNA复制不可能是保留复制。因为保留复制产生的第一代DNA离心后将有两条带：一条“轻带”（14N），一条“重带”（15N），但实验结果表明第一代DNA只有一条具中等密度的带 他们将15N标记的细菌在14N培养基上保持一代，然后提取DNA，加热到100度，使DNA双链变性为单链，再对变性的单链进行CsCl梯度密度超速离心. 发现了两条分开的条带，表明一条链是15N标记的，另一条链是14N标记的，因此DNA复制是半保留复制，而不是分散复制。 结合蛋白（SSB）结合在两条单链DNA上，形成复制叉。 DNA复制时，局部双螺旋解开形成两条单链，这种叉状结构称为复制叉。对于双向复制而言，形成的两个复制叉向相反方向行进，每个复制叉上的两条DNA链均被拷贝。 D型，单向，在动物线粒体中有 双链环在固定点解开，进行复制，但两条链合成速度不对称，一条链复制60%后，第二条链才开始复制。 复制子：由一个原点（origin)引发的 复制，称为一个复制子，即一个复制 单位。包含一个起点（origin）和一个终点（terminus）。 原核只有一个复制原点，因此只有一个复制子。 真核具有多个复制原点，因此有多个复制子 hnRNA（核内不均一RNA）:成熟mRNA的前体。 snRNA(核内小RNA)：参与hnRNA的剪接、转运。 snoRNA（核仁小RNA）：rRNA的加工、修饰。 scRNA（胞浆小RNA）：蛋白质内质网定位合成的信号识别体的组分。 mRNA前体剪接位点是由内含子末端的序列规定的。 通过对100多种真核细胞基因的分析，发现所有内含子都是以GU开始，以AG告终的保守序列（称GT-AG规律，此规律不适合于线粒体和叶绿体的内含子，也不适合于tRNA和某些rRNA的结构基因）。同时内含子还有一个重要的内部位点——分支点。 适应性表达(adaptive expression)指环境的变化容易使其表达水平改变的一类基因表达。 应环境条件变化基因表达水平增高的现象称为诱导(induction)，这类基因称为可诱导的基因(inducible gene)； 随环境条件变化而基因表达水平降低的现象称为阻遏(repression)，这类基因称为可阻遏的基因(repressible gene) 组成性表达(constitutive expression)指不大受环境变化而变化的一类基因表达。 组成性表达的产物组成性蛋白，是细胞或生物体整个生命过程中必不可少的，这类基因可称为看家基因(housekeeping gene) 真核生物的基因表达调控的不同层次 真核生物DNA水平的调控 在常染色质中表达的基因如移到异染色质则不表达；即紧密的染色质结构阻止基因表达。细胞分裂时染色体的大部分到间期时松开分散在核内，称为常染色质(euchromatin)，松散的染色质中的基因可以转录。染色体中的某些区段到分裂期后保持紧凑折叠的结构，在间期核中可以看到其浓集的斑块，称为异染色质(heterochromatin)，其中未见有基因转录 组蛋白是带正电荷的碱性蛋白质，可与DNA链上带负电荷的磷酸基相结合，从而封闭了DNA分子，妨碍基因转录。活跃转录的染色质区段中H1水平降低。 基因扩增是指某些基因的拷贝数专一性大量增加的现象。使细胞在短期内产生大量专一基因产物以满足生长发育的需要。是基因活性调控的一种方式。 非洲爪蟾卵母细胞rRNA 基因在DNA水平的调节 研究发现扩增产生的新 rDNA 不在线形染色体上，而是一环状小DNA分子方式存在 果蝇的不切离的多次复制使基因扩增 4. 生理适应性扩增1. 1. 非定向重排。例如转座子在染色体上的移动，转座 子的插入可激活某些基因，也可抑制某些基因。如顺 向末端重复序列的转座可能导致某些片段的缺失而使 启动子邻近结构基因而使其转录。 转座子插入也可使某些基因失活，如插入基因内部则 使基因失活。 ⑴ 定向重排可使一个基因从远离其启动子的位置移到 距启动子很近的位点而被启动，典型的例子是小鼠免 疫球蛋白结构基因的表达。