论文实例：乙型肝炎病毒复制性增强的机理研究.docVIP

论文实例：乙型肝炎病毒复制性增强的机理研究 作者简介：林旭，男，1970年04月出生，1998年09月师从于复旦大学闻玉梅教授，于2001年07月获博士学位。 摘要乙型肝炎病毒（HepatitisBVirus,HBV）的感染可表现为无症状携带、急性肝炎、慢性肝炎，并可发展为肝硬化与肝癌。近年来发现，除机体免疫应答外，HBV毒株的生物学特性与致病性相关。研究表明HBV复 制增强常导致毒力增强。本研究从我国天然存在的HBV株入手，研究HBV复制性增强的机理。这一研究不仅有助于阐明HBV的致病机制，还可为研制新的抗HBV药物奠定基础。 在本研究的第一部分，在从两例慢性乙肝患者血清中分离得到两株复制能力差异显著的全基因组HBVDNA基础上，采用构建高低复制株聚合酶功能区嵌合体及PCR定位点突变的研究策略，分析聚合酶的基因结构与复制性增强的机制。结果表明，位于逆转录酶功能区（RT区）的HBVDNA聚合酶第652位氨基酸Ser?Pro突变是导致HBV复制增强的决定性因素。蛋白三维结构模拟分析证实652位氨基酸Pro?Ser突变可使聚合酶的活性受损。HBVDNA聚合酶652位氨基酸是本研究发现的新的复制性功能位点，为研制针对该位点的抗HBV治疗药物奠定了基础。 本研究的第二部分从全基因组角度研究我国HBV相关性肝癌患中HBV复制的特性。通过对一例在四年间由HAg阳性无症状携带者发展至肝癌的患者的11株HBV全基因组分析，发现肝癌患者肝内全基因组HBVDNA复制能力高。此外还发现肝组织内的2.2KbHBV剪接变异体具有促进全基因组HBV复制的作用。肝内HBV全基因组及2.2Kb剪接变异体这种复制性增强特性可能是HBV持续性复制并导致我国HBV相关肝癌患者多见的重要原因之一。 关键词：乙型肝炎病毒　复制　RNA剪接基因变异　肝癌 中图分类号：R373.2＋1　 StudiesonTheMechanismsofEnhancedReplicativeEfficiencyofHepatitisBVirus ATRACT HepatitisBvirus(HBV)infectionhasabroadclinicalmanifestatioincludingasymptomaticcarrier,acutehepatitis,chronichepatitis,whichmayleadtocirrhosisandhepatocellularcarcinoma.Inthepastdecade,studiesshowedthatasidefromhostimmuereoes,thebiologicalcharacteristicsofHBVstraialsocontributedtothepathogenesisofHBVinfection.EnhancedreplicationcoulddilayenhancedvirulenceofHBVstrai.Inthisstudy,naturallyoccurringHBVstraiwereusedtostudythemechanismsofenhancedreplicativeefficiency.ThisstudynotonlywouldhelpfordeepunderstandingthepathogenesisofHBV,butalsocouldbeinformativefordevelopmentofnewanti-HBVtherapeuticdrugs. II-1 ThefirstpartofthisstudywasbasedontwoHBVstraiwithdifferentreplicativeefficiency,whichwereisolatedseparatelyfromtheseraoftwopatientswithchronichepatitis.Strategiestogeneratechimericgenomebypolymerasechainreactionandsite-directedmutagenesiswereemployedforcharacterizationofthefunctionaldomainreoiblefordifferentreplicationcompetencebetweenthesetwoHBVstrai.Resultsshowedthatasingleaminoacidsutitutionfromserinetoprolineinposition652withintheRTregionofpolymerasegenewasreoibleforsuchstrikingdifferencebetweenthesetwoHBVstrai.Moreo