AQP1 抑制剂4.docVIP

关于乙酰唑胺与碳酸氢钠联合是否影响肿瘤的生长、转移及水通道蛋白的表达 摘要：这项研究目的在于探索乙酰唑胺影响肿瘤的生长、转移以及可能的机制。使用感染了Lewis肺癌的大鼠作为动物模型。相比于联合使用碳酸氢钠是否对于肿瘤的生长转移以及碳酸脱苷酶的活动，使用咪唑影响肺癌的影响。同时使用Western-blot技术和免疫组化技术研究水通道蛋白1在肿瘤组织中的可能发挥的作用。结果显示单独使用乙酰唑胺可以大量降低肺癌的转移和原发肿瘤的生长，并且是一个独立影响发挥作用的因素。乙酰唑胺可以极大的抑制碳酸脱氧苷酶在肿瘤组织中的活动。在附加了碳酸氢钠之后，乙酰唑胺对肿瘤生长、转移的数量、以及原始肿瘤中碳酸酐酶发挥的作用并没有被改变，但是在肺组织中转移的抑制率以及在肺组织碳酸苷酶的活动似乎产生了一个明显的逆转，于单独使用乙酰唑胺相比。明确的作用机制需要在未来被一步一步证明。Wwstern-blot技术和免疫组化技术同时显示水通道蛋白1在肿瘤组织中的表达明显高于正常组织和单独接受过乙酰唑胺治疗的肿瘤组织。乙酰唑胺与碳酸氢钠结合使用并不能明显降低水通道蛋白的表达。结果显示乙酰唑胺的抗肿瘤机制，其中尤其是对抗转移的作用可能一部分包含了抑制碳酸酐酶的活动或者降低了水通道蛋白中水通道蛋白的表达，无论联合碳酸氢钠与否。 简介： 肿瘤转移是肿瘤的一大特点，并且是死亡的直接原因，碳酸托苷酶（CA）是锌结合金属蛋白的一个家族，这一家族可以促进二氧化碳可逆的水合作用，产生氢离子和碳酸氢根离子，并诱导ph值下降，一些碳酸托苷酶同工酶被显著的发现仅仅在肿瘤细胞中表达，这些CA同工酶通过细胞膜在邻近细胞中通过感应PH值和翻到质子和碳酸氢盐方面产生了一个重大的作用。研究已经显示酸性PH可以增加肿瘤细胞的侵袭性。乙酰唑胺是磺胺类的一种，被当做CA抑制剂。 T等报道CA抑制剂，作为化疗原则的一部分可以增加化疗药物的作用并且有助于延缓肿瘤进展，一些新型CA抑制剂，在试验中被当做抑制肿瘤细胞生长的有效成分，例如白血病、非小细胞肺癌、黑色素瘤、卵巢、肾、前列腺、乳腺细胞系列肿瘤。尽管存在一些CA抑制因子作用机制。人们依旧认为在直接抑制肿瘤相关CA同工酶后，导致了酸化肿瘤细胞外环境的抑制作用，这一切似乎与之前描述的理论相矛盾。因此，我们假设一定存在通过CA抑制因子抑制肿瘤转移的其他途径。 水通道蛋白，是一种作用于高选择性水通道膜蛋白的大家族，目前研究强调了他们在生物学上的作用，以及人类许多种疾病中，包含快速水通道的疾病，并且已经成为了介入治疗的目标靶向蛋白。AQP1是第一种水特点通道蛋白，广泛存在于红细胞膜、肾输尿管、脉络膜、眼睛、肺、血管内皮、肝管上皮细胞以及其他肿瘤细胞。许多肿瘤显示出极高的血管通透性和高的间隙渗透性，但是肿瘤中的水运输通路仍旧未知。 在之前已经出版的关于AQP1以及CA研究报道中，尤其是CA2和CA4，我们发现他们具有共同的生物学特点。例如，它们均在液体通道组织中广泛存在，包含肾脏、肺脏、大脑、眼睛、红细胞、胰腺以及一些腺体，它们均具有促进再吸收和分泌水的功能。此外，AQP1具有转运CO2的能力，二氧化碳是催化形成碳酸氢根离子的CA的基质，即具有碳酸酐酶和水通道蛋白二者相互共有的生物学特点。 作为一种碳酸苷酶抑制剂，乙酰唑胺主要用来治疗一些水肿性质的疾病，例如青光眼、登山病、充血性心力衰竭、药物诱发的水肿、以及纠正新陈代谢产生的碱中毒。P等已经显示单独使用乙酰唑胺可以抑制肿瘤细胞的潜在侵袭性作用，但是目前机制并没有被澄清。我们的实验也已经显示乙酰唑胺可以抑制AQP1在小鼠肾脏和睾丸中基因表达作用，在其中我们已经使用卵母细胞建立了一个水通道蛋白表达系统用来研究乙酰唑胺对于AQP1对于水通道功能的作用。并且已经证实乙酰唑胺是AQP1的一种直接抑制剂。因此我们假设乙酰唑胺关于AQP1基因表达作用和水通道作用的减少也许可以促进他们关于肿瘤生长和转移的影响作用。 在此项研究中，我们进一步评估了在肿瘤组织中AQP1的表达和它与碳酸酐酶活动的联系，并且进一步探索了它在肿瘤转移中的可能机制。众所周知，CA抑制剂最大的副作用就是新陈代谢引起的酸中毒，在长时间的使用之后。为了纠正细胞外的酸化环境，动物模型被用来同时联合使用碳酸氢男使用纠正酸中毒。 方法： 2.1使用Lewis肺癌细胞用作实验模型 成年动物重18-20克雌性大鼠购于北京大学实验中心，Lewis肺癌细胞有中国医学科学院提供，通过皮下注射均匀的将肿瘤组织注入体内，这些肿瘤组织由肺癌患者志愿者提供。 2.2药物治疗和组织收集。 2.3碳酸酐酶活动实验 2.4Western blot印记分析 2.5免于组织化学技术 2.6统计学分析 结果： 3.1 乙酰唑胺联合使用碳酸氢钠与否对于原发肿瘤生长以及自发形成肺转移的影响 3.2乙