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植物生理学设计性实验 上课时间：周二 第五组 乙烯利对油桃生理指标的影响 一、实验目的 1、通过本实验了解乙烯利对果蔬生理指标的影响。 2、掌握呼吸强度的测定方法。 3、掌握多酚氧化酶的测定方法及分光光度计的使用方法。 二 实验原理 乙烯利，是一种有机化合物，纯品为白色针状结晶，工业品为淡棕色液体，易溶于水，甲醇、丙酮、乙二醇、丙二醇，微溶于甲苯，不溶于石油醚。 用作农用植物生长刺激剂，乙烯利是优质高效植物生长调节剂,一分子乙烯利可以释放一分子的乙烯，具有促进果实成熟，刺激伤流，调节性别转化等效应，本实验主要研究的是乙烯利对果实成熟的影响，通过测定乙烯利处理后的果蔬呼吸强度及多酚氧化酶的活性，了解其对果蔬生理指标的影响。 呼吸强度的测定通常是采用定量碱液吸收果蔬在一定时间内呼吸所释放出来的CO2，再用酸滴定剩余的碱，即可计算出呼吸所释放出的CO2量，求出其呼吸强度。其单位为每kg每小时释放出CO2毫克数。 反应如下： 2NaOH + CO2→Na2CO3 + H2O Na2CO3 + BaCl2→BaCO3↓ + 2NaCl 2NaOH + H2C2O4 →Na2CO4 + 2H2O 测定可分为气流法和静置法两种。气流法设备较复杂，结果准确。静置法简便，但准确性较差。由于实验条件限制，本实验采用静置法 多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化生成醌。多酚氧化酶活性可以用比色法测量产物的形成，常用的底物如儿茶酚（邻苯二酚）和多巴（3，4-二羟苯丙氨酸）。 三、实验仪器、材料及试剂 1、实验仪器： 冰箱1台、移液管（1mL、2mL、5mL、10mL各一支）、洗耳球1个、培养皿1个、干燥器1台、三角瓶2个、刀片、烧杯 50mL 2个、研钵1套、离心机1台、离心管2支、恒温水浴锅1台、分光光度计1台、电子天平1台、试管2支，酸式滴定管1支。 2、材料：油桃【（1）、冷库贮藏；（2）、室温贮藏5天（乙烯利0.1%处理3天）】 3、试剂：0.1%乙烯利、0.4mol/LNaoH、Bacl2溶液、酚酞试剂、0.1mol/L草酸溶液、0.2mol/L磷酸缓冲溶液、蒸馏水、0.1mol/L邻苯二酚。 四 实验内容 1、呼吸强度的测定 采用静止法。吸取0.4mol?L-1的氢氧化钠溶液25ml于培养皿中，立即放入干燥器中，把已称重的果实（约1kg）放到干燥器中的隔架上，密封并记时，1h后，吸取10mLNaOH转移到三角瓶中，再加入1.0ml的Bacl2溶液和两滴酚酞，用以标定好的0.1mol?L-1的草酸溶液滴定至终点，以不放样品的空白组为对照，每个样品重复三组，操作同上。 呼吸强度的单位表示为CO2，mg?kg-1?h-1。 按下式计算： 呼吸强度（CO2，mg?kg-1?h-1）=0.1×（V样品-V空白）×44×25/（w×1） 式中：v样品为样品所消耗草酸的体积，单位mL v空白为空白组所消耗草酸的体积，单位mL 44为co2的质量分数 25为NaoH的体积，单位mL w为样品鲜重，单位g 1为所用时间，1h 实验结果记录在下表 2、多酚氧化酶(PPO)活性测定 称取果肉3.0 g加8.0 ml预冷的0.2 mol?L-1pH=6.2 Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液冰浴研磨成匀浆，于4500 rpm离心10 min，取上清液1.0 mL加4.5 mL缓冲液和0.5 mL 0.1 mol?L-1 邻苯二酚震荡摇匀，于37℃水浴恒温反应15 min，取出立即于沸水浴煮沸5 min，冷却后测其525 nm吸光度。以煮沸5 min的灭活酶液作空白对照。以每分钟内吸光度变化0.01为1个PPO活力单位（U）。 * 样品 样品质量 v样品 V空白 呼吸强度 未经乙烯利处理 经乙烯利处理 *