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第三章 常用的细胞化学染色方法 一、概述 定义：细胞化学染色是细胞学和化学相结合而形成的一门科学。它以细胞形态学为基础，结合运用化学反应的原理对血细胞内的各种化学物质作定性、定位、半定量分析的方法。 基本要求：原位显示细胞成分与结构 1、辅助判断急性白血病的细胞类型。 2、辅助血液系统疾病的诊断和鉴诊。 3、观察疾病疗效和预后。 4、发病机制的探讨。 （一）过氧化物酶染色（peroxidase,POX） 【原 理】 方法：二氨基联苯胺法 POX H2O2 H2O+[O] 二氨基联苯胺 金黄色沉淀 -2H 1、帮助鉴别急白类型 首选 1） 急白类型鉴别 急性淋巴细胞白血病其阳性率3%。 急粒阳性。 3）急性早幼粒细胞白血病（强阳）与急性单核细胞白血病的鉴别。 4）急性单核细胞白血病与组织细胞白血病或恶组鉴别：急单时幼单和单核细胞呈弱阳性，异常组织细胞阴性。 2、成熟中性粒细胞POX活性变化 活性增高：再障、感染、急淋、慢淋 活性减低：急粒、慢粒、急单、骨髓增生异常综合征（MDS）、放射病、退化性中性粒细胞。 苏丹黑染色 SB 与POX基本一致。可用陈旧涂片染色。 （三）酯酶染色 特异性酯酶分布较局限，主要存在于中性粒细胞和肥大细胞浆中。 非特异性酯酶分布较广，以单核、淋巴系最丰富，粒系亦有。 [一]特异性酯酶染色 (specific esterase,SE) 氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色(naphythol AS-D chloroacetate esterase, AS-D NCE) [原理] 氯乙酸AS-D萘酚AS-D NCE AS-D奈酚 重氮盐 有色沉淀↓ （坚固紫酱） 【染色反应】 【临床意义】 主要用于辅助鉴别急性白血病细胞类型。 急性粒细胞白血病：原粒阳性或阴性 急性早幼粒细胞白血病：白血病强阳性 急性单核细胞白血病：原单及幼单几乎为阴性 急性粒单细胞白血病：粒系呈阳性，单核系几乎呈阴性 急性淋巴细胞白血病：白血病细胞呈阴性反应 [二]非特异性酯酶染色 (non-specific esterase,NSE) [原理] α-醋酸萘酚 α-NAE萘酚 重氮盐 有色沉淀↓ （坚固蓝B） 在中性PH时用α醋酸萘酚作底物，正常成熟单核细胞及白血病性原、幼单均呈α-NAE（强）阳性，其他血细胞呈阴性或弱阳性，所以α-NAE又称为“单核细胞酯酶”，是单核细胞的标记酶，可被NaF抑制。 1．鉴别急白类型： 2．红血病、红白血病：异常幼红细胞呈阳性，阳性反应不被NaF抑制。 （四）过碘酸-雪夫反应（periodic acid-Schiff reaction，PAS）（糖原染色） 【原 理】 含乙二醇基（-CHOH-CHOH-）的糖类（含糖原、粘多糖、糖蛋白、糖酯等）被过碘酸（氧化剂）氧化，生成二醛基(CHO-CHO)，与雪夫试剂反应，使雪夫试剂中无色品红变为紫红色沉淀，定位于含有多糖类的胞浆中。 ??1、红细胞系统疾病中的应用 红血病或红白血病、骨髓增生异常综合征，幼红可呈阳性。 某些红系良性疾病，如缺铁贫、地贫、铁粒幼细胞性贫血，幼红可呈阳性。 巨幼贫、溶贫、再障时幼红呈阴性。 有助于巨幼贫与红白血病、再障与骨髓增生异常综合征鉴别。 2、三种白血病鉴别 急淋：白血病细胞阳性率增高，阳性物呈粗颗粒状或大块状。 急单：白血病细胞可呈阳性，阳性物小而多，弥散分布，胞浆边缘处颗粒较粗大。 急粒：白血病原始粒细胞呈阴性或弱阳性，阳性物均匀分布、细颗粒状或均匀红色。 恶性淋巴瘤：阳性率高、阳性强，呈块状或粗颗粒状。 3、其他： 高雪氏细胞和尼曼-匹克细胞：前者强阳性，后者弱阳性，且空泡处为阴性。 不典型巨核细胞与R-S细胞：前者强阳性，后者弱阳/阴性。 （五）中性粒细胞碱性磷酸酶染色（neutrophilic alkaline phosphatase,NAP） 【原 理】 方法：钙-钴法（置换反应） β甘油磷酸钠 NAP 甘油+磷酸