3-细胞凋亡与免疫.pptVIP

DNA细胞周期分析 含量与凋亡关系 DNA亚G1峰的检测：利用PI染色，检测具有亚G1期DNA含量的细胞比例，代表凋亡细胞数。 凋亡过程中，细胞内核酸酶的释放，将DNA降解，分解成小的片段，在标本制备中的固定处理时，细胞膜的完整性被破坏，使细胞内降解的DNA片段从细胞内流出，造成总体DNA含量减少，成为亚2倍体。 Cas3 与ced-3具有最大同源性； 在体内分布最广、活性最强； 可被Fas/FasL、颗粒酶或凋亡启动Cas激活； 活化的Cas3可激活其他亚类Cas成员。 (二)线粒体-细胞色素C途径 生理或病理性刺激 (放射线、化学药物、氧化剂、钙超载等） →线粒体外膜通透性↑ →内膜电化学梯度↓ →释放cyto-C至胞浆 →与凋亡相关因子（Cas9、Apaf-1等）结合 →形成凋亡体（apoptosome) →激活Cas级联反应 →细胞凋亡 细胞色素C cyto-c+Apaf1(apoptosis protease activating factor1)+pro-Cas9 →结合为凋亡体（apoptosome) →Cas9酶原被酶切为有活性的Cas9 →酶切Cas3酶原 →Cas3激活 →细胞凋亡 线粒体途径调控机制 *Bcl-2 →阻止线粒体释放cyto-C→抑制凋亡 *Ｂax →促进线粒体释放cyto-C→促凋亡 * AIF(apoptosis-induced factor) 　AIF →激活Cas3，核染色质凝聚、DNA断裂 　↓→促进线粒体释放cyto-c * IAP(inhibitor of apoptosis protei) →抑制线粒体活化 * 活性氧（超氧阴离子、超氧化物、脂质过氧化物） →激活Apaf-1、Cas3、Cas9 →细胞凋亡 死亡受体与线粒体途径的关系 Cas8 →切割Bid →Bid羧基末端转位至线粒体 →激活线粒体途径 (三)颗粒酶B途径 CTL释放颗粒 →颗粒与靶细胞表面M6P-R（mannose-6-phosphate receptor）结合而被内吞 →穿孔素作用下，颗粒酶从颗粒中释放 (Cas依赖途径） →直接剪切并激活Caspase-3 →启动Caspase级联效应 →介导细胞凋亡 Caspase非依赖性途径 颗粒酶B直接剪切Bid →产生tBid →tBid与Bax转位于线粒体 →释放细胞色素C →形成凋亡体apoptosome →激活Caspase-9及其下游的Caspase-3 →细胞凋亡 （四）死亡忽略途径 免疫应答末期抗原刺激逐渐消失 →活化的T细胞IL-2及IL-2R表达水平↓ （细胞因子撤离） →高表达致凋亡蛋白Bax、Bak、Bim等 生理学意义 在免疫应答末期，随抗原量逐渐降低，及时清除对外源性抗原特异性的T细胞，从而维持免疫自稳状态。 CTL表达FasL诱导靶细胞凋亡 * 经典多药耐药基因（MDR）表达 →药物代谢加快、靶细胞改变 →瘤细胞DNA受损得以修复 →抗凋亡 →抗药 * 凋亡相关基因突变 →加速肿瘤进展、降低抗瘤疗效 Neglect pathway Bcl-2 Family Members Regulate Mitochondrial Integrity 一、细胞凋亡概述 二、细胞凋亡的分子机制 三、细胞凋亡的胞内调控机制四、细胞凋亡与免疫生理 五、细胞凋亡与疾病 凋亡-基础与临床 （一）Bcl-2家族 * 抑制凋亡的Bcl-2家族成员 Bcl-2、Bcl-xL、Bcl-w、Bfl-1、Brag-1、Mcl-1、A1 * 促凋亡的Bcl-2家族成员 Bax、Bak、Bok、BCL-XS、Bad、Bid、Bik、Blk、Hrk * 均含至少一种共有结构域（BH1、BH2） （Bcl-2 homolougs domain） 促凋亡的Bcl-2成员均含BH1-BH3。 三、细胞凋亡的胞内调控机制 1．Bcl-2（B-cell lymphoma-2） * 表达：线粒体膜 * 作用机制 1）促进线粒体释放DPF(death promoting factor) (cyto C、apoptosis-indu