10玉米小斑病抗性鉴定.ppt

一、实验目的 学习和初步掌握玉米小斑病抗性鉴定技术。 1、玉米小斑病的主要症状特征观察。 2、玉米小斑病的接种方法。 3、玉米小斑病的病情与抗性级别鉴定。 二、内容说明 　　　玉米小斑病（Helminthosporium maydis）是温暧潮湿地区玉米产区广泛发生的一种病害，也是我国玉米生产上的主要病害之一，流行年份往往造成严重损失。选育抗病自交系和杂交种，是防治小斑病最经济有效的措施。玉米从幼苗到成株均可发病，通常从下部叶片开始向上蔓延，先从叶面产生褐色小点，后扩大成2~3mm的褐色病斑，病斑受叶脉限制，常常成不规则形。发病适温为25~30℃ 。 内容说明(续) 　　 根据小斑病菌侵染特点的不同，可将小斑病菌划分为O小种和T小种两个生理小种。T小种对T型细胞质有专化毒性，故育种上应尽量避免使用有专化性的细胞质类型。玉米对小斑病抗性表现亦有两种，一是多基因控制，表现为病斑数量少，在保湿条件下，病斑形成的孢子少，孢子形成时间较长。二是由隐性单基因rhm控制，表现为小的褪绿病斑。 鉴定玉米育咱材料抗小斑病的方法有自然诱发鉴定，大田诱发鉴定和人工接种鉴定。但以人工接种鉴定较为可靠。 三、所需用品和操作方法 （一）所需用品 1、材料：供试玉米材料、玉米抗病和感病对照材料。玉米小斑病菌种，T小种的培养物；上一季感染O小种小斑病的玉米植株病叶。 2、仪器用具：高压灭菌锅、超净工作台、酒精灯、接种环、恒温箱、烧杯、漏斗、试管、纱布、玻璃棒、培养皿、显微镜、小喷雾器、保湿罩等。 3、药品试剂：75%酒精、0.1%升汞溶液、葡萄糖、琼脂、马铃薯等。 （二）操作方法 1.　苗期接种鉴定 （1）菌种的培养 ①病原菌的分离 　　　选取新鲜病叶作为分离材料，在灭菌室内进行操作。先将病斑剪成4~5mm2大小，约30~40块，然后分别将病组织小块置于0.1%升汞溶液中消毒1min，立即取出，按无菌操作方法投入无菌水中清洗三次，每次2~3min。最后以无菌操作方法，将病斑组织按正方形四点排列，栽种在PDA平板培养基（去皮马铃薯20g，葡萄糖10~20g，琼脂17~20g，水100ml）上，置25~30℃ 温箱中培养约7天。 ②　菌种的纯化 　　　选取培养性状典型的菌落，按无菌操作方法移植到斜面培养基上（每个典型菌落移3管），然后再放在25℃ 恒温下培养。待产生孢子后，选取菌落较一致的斜面1~2管，挑取一点，观察孢子的形状、分隔数、脐点特点。然后计测孢子大小。确认纯种后，再用斜面培养基扩大培养，让其产生大量孢子后，置冰箱中保存待用。 （2）孢子悬浮液的制备 　　　用少量无菌水倒入已产孢子的斜面培养基试管中，猛力摇动冲洗孢子。也可辅以接种环表层刮除。最后将所有冲洗孢子液集中在洁净的三角瓶中。用纱布滤去菌丝及培养基，滤液用蒸馏水稀释，调至在100倍显微镜下每个视野有5个孢子浓度的悬浮液待用。 （3）接种病菌 　　　接种小斑病的适宜时期是在玉米6个叶片左右。接种前在配制好的孢子液中加入2%蔗糖，以促进病菌孢子萌发。接种菌液量是每株1~2ml。用微型喷雾器均匀喷雾，喷后立即以塑料袋套盆保温，置25℃左右温度下保湿24小时。 （4）病情鉴定和分级标准 　　接种后7~10天即可进行病情鉴定。鉴定应在同一天内完成。鉴定项目和标准如下： ①　发病程度 以叶片为单位进行鉴定。根据病斑占叶片面积的百分率，记载每片叶的感病程度。发病程度分为9级（表1）。鉴定接种部位的叶片，每株4片叶，每个供试材料10株共40片。 以整株为单位，根据整株的发病情况，分为7个等级（表2）。而后，以叶片为单位，计算病叶率和病情指数。 　病情计算公式 表1 玉米小斑病叶片发病程度分级标准 表2 玉米小斑病整株发病程度分级标准 病情鉴定和分级标准（续） ②　病斑长度 随机测量40个独立的病斑，每株4个，以mm为单位。 ③　抗病性的反应型 病斑反应型分为三级，分级标准见表3。 表3 玉米小斑病抗性反应型分级标准 2.　成株期接种鉴定 ①　接种：抽雄前将粉碎的头一年病叶撒入心叶喇叭口，接种应在下午或傍晚湿度较大时进行。天气干燥时，接种后可在每株心叶喷水。 ②　病情鉴定和分级标准：抽丝后15天左右进行病情鉴定，鉴定应在同一天内完成。发病程度以整株为单位，分7个等级。分级标准见表2。一般用于苗期和成株期抗病性鉴定。整株调查中，植株上、中、下叶片的划分，以第一果穗上下两片叶为中部叶，其下为下部叶，其上为上部叶。 表2 玉米小斑病整株发病程度分级标准 ③　病株率和病情指数计算 　　病株率和病情指数计算方法是以整株为单位进行。 四、作业 1、玉米小斑病发病的适宜条件是什么？ 2、玉米小斑病的典型特征为何？ 3、玉米小斑病鉴定的基本环节有哪些