《氧化低密度脂蛋白定量测定试剂盒说明书》.docVIP

氧化低密度脂蛋白定量测定试剂盒（酶联免疫法）说明书 【产品名称】 通用名称：氧化低密度脂蛋白定量测定试剂盒（酶联免疫法）氧化低密度脂蛋白定量测定试剂盒（酶联免疫法）英文名称：Requirement for Oxidized Low Density Lipoprotein Detection Kit （ELISA） 【包装规格】 96人份/盒；48人份/盒。 【预期用途】 本品为体外定量检测血中氧化低密度脂蛋白（Oxidized Low Density Lipoprotein，OxLDL）含量的试剂。【检验原理】 本试验采用双抗体夹心直接酶联免疫法。用抗人OxLDL抗体预包被微孔板，使样品中的OxLDL与固相化在微孔板上的抗人OxLDL抗体结合后，将未反应的组分洗脱，再加入酶标记抗体进行酶底物显色，在450nm波长下测定光吸收值，并根据在同一微孔板内反应的校准品制作的剂量-反应曲线，求得样品中OxLDL的含量。 【主要组成成份】见表1。 表1 本试剂盒主要组成成编号 组 成 规格 数量 1 固相抗体微孔板 96孔 / 48孔 1块 2 OxLDL校准品 0，1，2，4，8，16U/ml 各1瓶 3 质控物 高、低 各1瓶 4 酶标记抗体 100μl 1支 5 浓缩洗涤液（21×） 30ml 1瓶 6 浓缩稀释液（5×） 10ml 1瓶 7 样品反应液 12ml 1瓶 8 底物液A 6ml 1瓶 9 底物液B 6ml 1瓶 10 终止液 6ml 1瓶 【储存条件及有效期】 储存条件：2~8℃避光保存。 有效期：1个月。固相抗体微孔板2~8℃，于封口的铝箔袋中 OxLDL校准品2~8℃ 质控物2~8℃ 酶标记抗体2~8℃，避光 洗涤液（1×） 2~8℃ 稀释液（×） 2~8℃ 底物液（配制后） 新鲜配制后使用 酶标记抗体12个月2~8℃，避光 洗涤液稀释液12个月2~8℃底物液A、B 12个月2~8℃ 样品反应液、终止液 12个月2~8℃ 【适用仪器】 1、带有单波长检测能力的酶标仪，有450nm滤光片，增益应小于20。 2、微孔板清洗器。 【样本要求】 采集禁食12小时后空腹血，分离血浆或血清。如采用血浆样本建议使用EDTA抗凝血浆。样品在2~8℃可存放一周。由于冻融对检测结果影响较大，故待测样品不能冻存。严重溶血和微生物污染的样本不能使用。 【检验方法】 试剂配制： (1) 测定前10分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 (2) 将10ml浓缩稀释液（5×）用40ml水稀释至1×。 (3) 将30ml浓缩洗涤液（21×）用600ml水稀释至1×。 (4) 校准品的复溶：在OxLDL校准品（0、1、2、4、8、16U/ml）及高、低质控物中分别加入1ml水进行复溶，静置3分钟，摇匀。 (5) 酶标记抗体工作液：取80μl酶标记抗体，稀释液(6) 底物液：底物液A底物液B，充分混匀临用前配制底物液A底物液。 2. 洗板方法： (1) 自动洗板：要求每孔注入洗涤液350μl，注入与吸出间隔15~30秒。 (2) 手工洗板：倾去孔内液体，每孔加洗涤液350μl，静止30秒后倾去洗涤液，在吸水纸上拍干。3．测定步骤： (1) 稀释样品：用稀释液将样品稀释4倍。 (2) 准备微孔板：撕开密封袋，取出微孔板，去除封板胶纸，用洗涤液洗涤3次，备用。 (3) 加样：将校准品、质控物和待测样品加入微孔板，25μl/孔，再加入反应液，100μl/孔，37℃下孵育2小时。 可参考表所示加样顺序进行加样。 表 加样顺序示例 孔 样品 孔 样品 1A-B 校准品0 U/ml 3A-B 待测样品 1C-D 校准品1 U/ml 3C-D 待测样品 1E-F 校准品2 U/ml 3E-F 待测样品 1G-H 校准品4 U/ml 3G-H 待测样品 2A-B 校准品8 U/ml 4A-B 待测样品 2C-D 校准品16U/ml 4C-D 待测样品 2E-F 质控物（低） 4E-F 待测样品 2G-H 质控物（高） 4G-H 待测样品 (4) 洗板5次。 (5) 加入酶标记抗体工作液，100μl/孔，37℃下孵育1小时。 (6) 洗板5次。 (7) 加入底物液，100μl/孔， 37℃下避光孵育15分钟。 (8) 加入终止液，50μl/孔。 (9) 测定光吸收值：启动酶标仪，于终止反应后30分钟内读数，测定波长450nm。 4. 试验过程中应注意： (1) 严格控制反应时间。 (2) 在加入试剂时应沿着孔壁加入，以免外溅。 (3) 配好的底物液要避光。 (4) 酶标记物含有甘油，较粘稠，要小心加入以确保结果精确。 5．质量控制： 每个微孔板上至少采用两个浓度的质控物进行质量控制，以确保每个微孔板测