β-甘露聚糖酶产生菌的筛选和酶学性质探讨.docVIP

β-甘露聚糖酶产生菌的筛选和酶学性质探讨5株株产胞外β-甘露聚糖酶的菌菌株，其中DK3菌株的摇瓶瓶培养液的酶活力达/ml。。该酶水解葡甘露聚糖的最适适温度为37℃，最适pH为为，pH稳定范围为~，在低低于40℃的温度下基本稳定定。Fe2 、Cu2 、EEDTA和NH4 对该酶有有抑制作用，Na 则有激活活作用。 -甘露露 β-1,4-D-甘露聚聚糖酶(β-1,4-D-mmannanmannanoohydrolase，)是是一类能水解含有β-1,44-D-甘露糖为主链的多糖糖(包括甘露聚糖、半乳甘露露聚糖、葡甘聚糖等)的内切切酶[1]。该酶用途广泛，，能分解魔芋葡甘露聚糖，生生产能促进双歧杆菌生长、改改善肠道菌群结构的魔芋低聚聚糖；可作为工具酶用于天然然多糖类结构的分析；在造纸纸工业中，与β-木聚糖酶等等半纤维素降解酶类协同使用用，能除去纸浆中的半纤维素素，改善纸质；在纺织工业中中用于纤维中半纤维素的降解解，能有效去除纺织品所粘附附的多余染料；在饲料工业中中用作酶添[2-4]]。虽然β-甘露聚糖酶的应应用前景广阔，但目前总的来来说，其低产和高成本限制了了其应用范围和规模，能改变变这种状况的最重要的途径之之一是筛选和培育产高活力ββ-甘露聚糖酶的高产菌株。。 1材料与方法 土壤样品从广西大学农场场甘蔗地、广西南丹县魔芋种种植地和南宁绿源肥料厂堆肥肥地采集。 试剂 葡甘露聚聚糖（商品名：魔芋精粉）购购自武汉市清江魔芋制品有限限公司。 其它试剂均为分析析纯试剂。 培养基 富集培培养基（）：魔芋精粉，酵母母膏，蛋白胨，； 固体分离离培养基（）：魔芋精粉，，，MgSO4·，，，FeSSO4·，琼脂，； MgSO44·，，，FeSO4·，；； MgSO4·，，，，FeSO4·，。 称取1g土壤壤于试管中，加入l0ml蒸蒸馏水，振荡混匀，取lmll接种到富集培养基中，377℃，160rpm培养244h。选择培养液粘度明显下下降的菌液，用无菌水梯度稀稀释后涂布于固体分离培养基基中，置37℃培养箱中培养养24h，用刚果红染色，观观察菌落周围有无透明圈，挑挑取透明圈大的单菌落进行划划线纯化。经纯化后的菌株在在发酵培养基中培养24h，，测定培养液中β-甘露聚糖糖酶的活力，筛选出酶活力高高的菌株。 -甘露聚糖酶酶粗酶液的制备 37℃培培养24h，按l比例接入产产酶培养基中，37℃，1660rpm培养24h。发酵酵液离心所得上清液即为粗酶酶液。 -甘露聚糖酶酶活活力的测定 (w/v)葡甘露聚糖((用，/L磷酸钠缓冲液配制制)，加入适当浓度的酶液，，37℃水浴反应15minn，用DNS法测定所产生的的还原糖[7]。 1μmolD-甘露糖的的还原糖所需酶量为1个酶活活力单位(U)。 2结果 从土样中筛选出55株产β-甘露聚糖酶的高产产菌株（编号为DK1~5））,其中DK3菌株的摇瓶培培养液的粘度下降快，菌落周周围有大的透明圈，摇瓶培养养液中的β-甘露聚糖酶活力力达/ml（表1）。 11菌株筛选结果 β-甘露聚糖酶活力（U//ml） DK1 DK2 DK3 DK4 DK5 温度对酶酶活力的影响：在30~700℃下测定β-甘露聚糖酶的的活性，结果表明，该酶分解解葡甘露聚糖的最适温度为337℃，在30~45℃都具具有较高的活力（图1）。 1β-甘露聚糖酶促反应应最适温度 440、50、60℃恒温水浴浴中处理，每隔20min取取样，测定残留酶活力（以未未经处理的酶液作对照）。结结果表明，该酶在40℃下相相对稳定（图2）。 2ββ-甘露聚糖酶的温度稳定性性 12全文查看 construction, mechanism construction and quantitative assessment, give full play to the assistant role of leadership, actively promote the innovation of research information development, and vigorously promote the research work of information to mention upgrading, efforts to improve the ability and level of decision-making.(a) adhere to the decision in the first place. To make the decision service as the focus of the work, participate in the