乙肝五项操作规程.docVIP

昆仑泌尿外科医院检验科 免疫室作业指导书 文件编号；SZKL-MY-05 版本/修订号；1/0 主题内容 乙肝五项检测 乳胶法 操作规程 生效日期：座机电话号码 页码：第 1页 共4页 乙肝五项（乳胶法）操作规程 1.检测目的 乙型肝炎病毒标志物 HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb 检测。 2.测定原理 HBsAg检测采用双抗体夹心法原理，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T区）的抗体。检测时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的乳胶颗粒（即标记物）结合的HBsAb（即标记抗体）反应，该结合物随之在毛细效应下向上层析。如是阳性，乳胶抗体（标记抗体）在层析过程中先与标本中的HBsAg结合，随后结合物会被固定在T区膜上的HBsAb捕获，形成HBsAb标记抗体-HBsAg-HBsAb复合物，从而在T区形成一条红杠。如为阴性，则T区没有红杠。 HBsAb检测采用双抗原夹心法原理，试剂含有事先固定于膜上测试区（T区）的HBsAg。检测时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的乳胶颗粒结合的HBsAg反应（即标记抗原）反应，该结合物随之在毛细效应下向上层析。如是阳性，乳胶抗原（标记抗原）在层析过程中先与标本中的HBsAb结合，随后结合物会被固定在T区膜上的HBsAg捕获，形成HBsAg标记抗原-HBsAb-HBsAg复合物，从而在T区形成一条红杠。如为阴性，则T区没有红杠。 HBeAg检测采用双抗体夹心法原理。试剂含有事先固定于膜上测试区（T区）的HBeAb。检测时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的乳胶颗粒结合的HBeAb反应（即标记抗体）反应，该结合物随之在毛细效应下向上层析。如是阳性，乳胶抗体（标记抗体）在层析过程中先与标本中的HBeAg结合，随后结合物会被固定在T区膜上的HBeAb捕获，形成HBeAb标记抗原-HBeAg-HBeAb复合物，从而在T区形成一条红杠。如为阴性，则T区没有红杠。 HBeAg、HBcAb采用竞争抑制法原理，试剂含有事先固定于膜上测试区（T区）的抗体。检测时，标本滴入试剂加样处，随之标本在毛细效应下向上层析。如标本中含有相应的抗体，则同膜上测试区 T 的单克隆抗体竞争，与预包被在乳胶颗粒上的相应抗原反应。如标本中没有相应的抗体，则预包被在乳胶颗粒上的相应抗原与膜上测试区 T 的单克隆抗体全部结合。 阳性标本，测试区 T 将没有红色条带；阴性标本，测试区 T 会出现明显的红色条带。 昆仑泌尿外科医院检验科 免疫室作业指导书 文件编号；SZKL-MY-05 版本/修订号；1/0 主题内容 乙肝五项检测 乳胶法 操作规程 生效日期：座机电话号码 页码：第 2页 共4页 3.标本采集 样本采集后应尽快分离血清或血浆以避免溶血。检测进应尽量使用新鲜的样本。样本若不能及时送检，可在2-8℃冷藏3天。长期保存需冷冻于-20℃，忌反复冻融。发臭、溶血等异常样本请勿使用。 4.试剂 艾博生物医药有限公司 5.操作步骤 5.1 使用前将试剂板和血清／血浆标本恢复至室温 20～30％ 。从原包装铝箔袋中取出试剂盒 注意：在扣开铝箔前应先恢复至室温 ，在1小时内应尽快地使用。 5.2将试剂盒置于干净平坦的台面上，用吸管吸取血清／血浆标本，逐滴垂直加入于试剂板的 五个加样子 L中 每孔2-3 滴 。 5.3加样后立刻开始计时，等待红色条带的出现，在 15 分钟时读取测试结果。在 20 分钟后读 取的结果无效。 6.结果判定 由于前三个项目 HBsAg、HBsAb、HBeAg 使用双抗体 原 夹心法原理，后两个项日HBeAb、HbcAb 使用竞争法原理。因此前一：个项日与后两个项目判读方法是不同的，请注意区别。 6.l. HBsAg、HBsAb、HbeAg 6.1.1阳性 + ： 两条红色条带出现。一条于测试区 T 内，另一条位于质控区 C 。阳性结果表明： 标本中含有待测物质。 6.1.2阴性 - ：质控区 c 出现一条红色条带，在测试区 T 内无红色条带出现。 阴性结果表明： 标本中检测不出待测物质。6.1.3无效：质控区 c 未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质损坏。在 此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂盒重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。 6.1.4注意：在进行 HBsAg、HBsAb、HbeAg 测试时，测试区 T 内的红色条带可显现出颜色深浅 的现象。只要在规定的观察时间内，不论该条带颜色深浅，即使只有非常弱的色带也应 昆仑泌尿外科医院检验科 免疫室作业指导书 文件编号；SZKL-MY-05 版本/修订号；1/0 主题内容 乙肝五项检测 乳胶法 操作规程 生效日期：座机电话号码 页码：第 3页 共