5.1_DNA的粗提取与鉴定解析.ppt

* 一、基础知识 1、提取生物大分子的基本思路 2、提取DNA的基本思路 利用DNA与 等在 方面的差异，提取DNA，去除其他成分 选用一定的 分离具有不同 的生物大分子 3、DNA提取原理 (1) DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同。 当NaCl的物质的量浓度为 mol／L时,DNA的溶解度最低。 蛋白质在0.14mol/L中的溶解度大，在高盐浓度下溶解度小。 (2)DNA不溶于酒精，细胞中某些蛋白质则溶于酒精。 (3)DNA在 80℃ 以上才会变性，而在该温度下蛋白质会变性沉淀。 (4)洗涤剂可以瓦解细胞膜，但对DNA没影响。 (5)DNA的鉴定原理 在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺呈现蓝色。 二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计 （一）实验材料的选取 选取DNA含量相对较高的生物组织。 从核DNA数目来看，猪38条，鸡78条，哺乳动物血0条，猕猴桃58条，洋葱16条，香蕉 33条，菠菜12条，大肠杆菌1条。 材料：新鲜的鸡血 注意：本实验中，要往鸡血中加入抗凝剂　　 　　　　（柠檬酸钠溶液） (1)先将新鲜的鸡血离心，获得鸡血细胞 (2)在鸡血细胞中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 1、破碎细胞 2、过滤，获取含DNA的滤液 植物细胞要如何获取DNA？ 思考 　　答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解 讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？ 答：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等 讨论：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？ 答：可能含有核蛋白和RNA等杂质 （三）去除滤液中的杂质 方案一　　　讨论：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质 答：用高盐溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓液使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质 方案二、三 讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？ 答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离 方案二利用了酶的专一性；方案三利用了DNA的稳定性。 （四） DNA的析出与鉴定 DNA的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒精溶液（体积分数为95％），静置2-3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水 1、DNA的析出 2、 DNA的鉴定 鉴定DNA时在试管中先加入物质的量的浓度为2mol/L 的NaCl溶液5ml于两只试管中，其中一只加入DNA丝状物，各加入二苯胺4ml 试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min,待试管冷却后，比较两只试管中溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否有蓝色。 1、DNA的溶解度最低时，NaCl的物质的量浓度为（ ） A 2mol/l B 0.1mol/l C 0.14mol/l D 0.015mol/l C 2、在向溶解DNA的NaCl溶液中，不断加入蒸馏水的目的是（ 　　） A 加快DNA溶解的速度 B 加快溶解杂质的速度 C 减小DNA的溶解度，加快DNA析出 D减小杂质的溶解度，加快杂质的析出 C 3、向溶有DNA的2mol/L的NaCl溶液中不断加入蒸馏水,在这个过程中DNA的溶解度变化情况分别是 A 减小;减小 B 增大;增大 C 先减小后增大 D增大; 减小 4、欲使溶有DNA的2mol/L的NaCl溶液中的DNA析出，最有效的办法是 A 加蒸馏水 B 加矿泉水 C 加清水 D 加生理盐水 C A 5、与析出DNA粘稠物有关的叙述，不正确的是 A 操作时缓慢滴加蒸馏水，降低DNA的溶解度 B 操作时用玻棒轻缓搅拌以保证DNA分子的完整 C 加蒸馏水可以同时降低DNA和蛋白质的溶解度 D 当丝状粘稠物不再增加时，NaCl溶液的浓度可以认为是0.14mol/L 6、你能采用其他方法对DNA进行鉴定吗？ 用甲基绿染液。结果丝状呈现绿色。 C 8.实验中Na