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实 验 2-1 细菌的荚膜染色 细菌的染色和细菌细胞构造的观察 目的要求 染色原理 实验材料 实验程序 思考题 目的要求 无菌操作 微生物涂片 荚膜染色（固氮球菌） 熟炼显微镜使用 细菌的荚膜染色原理 由于荚膜与染料间的亲和力弱，不易着色，通常采用负染色法染荚膜，即设法使菌体和背景着色而荚膜不着色，从而使荚膜在菌体周围呈一透明圈。由于荚膜的含水量在90%以上，故染色时一般不加热固定，以免荚膜皱缩变形。 负染色法 实验材料 涂片染色用的细菌培养物 荚膜染色（固氮球菌）24h的斜面培养物。 用滤纸过滤后的苯胺黑、复红染色液。 显微镜、镜头油、擦镜纸、吸水纸等。 实验程序 （负染色法的方法和步骤） （1）制片：取洁净的载玻片一块，加蒸馏水一滴，取少量菌体放入水滴中混匀并涂布。 （2）干燥：将涂片放在空气中晾干或用电吹风冷风吹干。 （3）染色：在涂面上加复红染色液染色3—5min。 （4）水洗：用水洗去复红染液。 （5）干燥：将染色片放空气中晾干。 （6）涂黑素：在染色涂面左边加一小滴苯胺黑，用一边缘光滑的载玻片轻轻接触苯胺黑，使苯胺黑沿玻片后缘散开（夹角30度），然后推向另一侧，使黑素在染色涂面上成为一薄层，并迅速风干。 （7）镜检：先低倍镜，再高倍镜观察。 观察：背景、菌体、荚膜、细菌形态等，并绘图。 Free-Living Aerobic Nitrogen-Fixing Bacteria Large, gram-negative, obligately aerobic rods, capable of fixing N2 nonsymbiotically Azotobacter has the highest respiratory rate of any living organism (purple bacteria) Azotobacter cells are very large, almost the size of yeasts, produce cysts Free-Living Aerobic Nitrogen-Fixing Bacteria Major genera: Azotobacter, Azomonas, Azospirillum and Beijerinckia, Derxia 思　考　题 荚膜负染法为什么不用热固定？ 为什么包在荚膜内的菌体着色，而荚膜不着色？ 简约流程 制片――干燥（空气中晾干或用冷风吹干――复红染色液染色3-5min――水洗――干燥（晾干）――涂苯胺黑（薄层）――风干――镜检――记录 实 验 2-1 结 束 染色简约流程 荚膜染色 制片――干燥（空气中晾干或用冷风吹干――复红染色液染色3-5min――水洗――干燥（晾干）――涂苯胺黑（薄层）――风干――镜检――记录 芽孢染色 涂片－－干燥－－固定――5%孔雀绿水溶液，加热至染液冒蒸汽，约维持5min（勿干）――冷却――水洗――番红液染色1-2min ――水洗－－晾干或吸干――镜检――记录 * * Vegatative cells of Azotobacter vinelandii Cysts Azotobacter cysts have low endogenous respiration and are resistant to desiccation, mechanical disintegration, and UV as well as ionizing radiation however, they are not especially heat-resistant Colonies of Beijerinckia species growing on a carbohydrate-containing medium Derxia gummosa encased in slime