实验六细胞有丝分裂的制片及观察.docVIP

实验六 ?细胞有丝分裂的制片及观察 [实验目的] 1. 初步掌握植物细胞有丝分裂临时压片的方法。 2. 通过对动植物细胞有丝分裂标本的观察，掌握细胞分裂过程及其特点。 3. 了解动、植物细胞有丝分裂过程的主要区别。 [实验原理] 多细胞生物的生长、发育均以细胞分裂的方式实现。细胞分裂有无丝分裂、有丝分裂、减数分裂几种方式，其中有丝分裂是最主要的方式。有丝分裂在处于增殖状态的组织中广泛存在，根据这一现象，我们取分裂旺盛的组织如植物的根尖、动物的骨髓细胞，胚胎细胞进行特殊处理，制成光镜切片或压片，在显微镜下即可对有丝分裂进行观察和分析，从而了解各分裂时期的形态特点及变化规律。 [实验用品] 1. 材料：新鲜洋葱根尖标本、洋葱根尖纵切片、马蛔虫子宫切片。 2. 器材：显微镜、盖玻片、载玻片、小烧杯、吸水纸、剪刀、镊子、吸管、恒温培养箱、酒精灯、刀片。 3. 试剂：甲醇、冰醋酸、70%酒精、1mol/l hcl、苯酚、品红、0.5%甲苯胺蓝、山梨醇、福尔马林、蒸馏水、秋水仙素。 [实验内容与方法] 一、植物细胞有丝分裂制片及观察 (一)植物根尖压片的制备 1. 药品配制 (1)卡诺氏固定液：95% 酒精15ml，冰醋酸5ml，混合(也可用纯酒精30ml、氯仿15ml、 冰醋酸5ml混合)。 (2) 0.5% 甲苯胺蓝染液：甲苯胺蓝0.5g，蒸馏水100ml，混合摇匀。 (3) 改良碱性品红染液：该染色液是先配成a液，然后再配成b液、c液及工作液，配方如下： ??? a液：碱性品红3g，70%乙醇10ml。 ??? b液：a液10ml加5%苯酚水溶液90ml。 c液：b液55ml加冰醋酸6ml、37%福尔马林6ml。 ??? 工作液：c液10ml加45%冰醋酸90ml，山梨醇1.8g混合溶解。 2. 根尖培养及处理：取洋葱鳞茎，剪去老根，置于盛满清水的小烧杯里，使部分鳞茎浸入水中，室温（25°c）或放25°c左右的恒温箱中培养。约3～4天后，鳞茎长出不定根，于晚12时至1时或中午12点左右将根剪下（约1cm长），放入0.05%～0.1%的秋水仙素溶液中，经2～4小时后移入卡诺氏固定液中固定。根尖也可剪下后直接投入固定液中，材料经固定24小时后取出放70%酒精中保存。用70%酒精保存（4°c冰箱中）的根尖半年后使用仍可保持其观察效果。 3. 解离和压片：将固定后的根尖用清水冲洗后放入盛有少量1mol/l hcl的小烧杯中，置60°c热水中（最好在恒温水浴箱中进行）解离10分钟左右，待根尖发白变软后取出，放蒸馏水中漂洗30分钟，然后移至载玻片上，用吸水纸吸去多余的水份。滴加0.5%甲苯胺蓝或改良苯酚品红染液1～2滴加盖玻片，用铅笔头或指头轻轻敲击（不要挪动标本，使细胞和染色体分散开来，以便观察），见根尖压扁铺开后置于显微镜下观察。 (二)洋葱根尖有丝分裂的观察 观察洋葱根尖压片和洋葱根尖切片标本，按图所示观察分裂各期的特点。观察时先用低倍镜找到根尖较前端生长点部位，此处细胞略呈方形，排列紧密，染色较深，该处可见到许多处于不同分裂期的细胞。转换高倍镜观察，可见间期及有丝分裂各期的细胞，如图5-1所示。各期特点如下： 1. 间期（interphase）：细胞核呈圆形，核膜清楚，核内染色质分布较均匀，呈细网状。由于染色质易与碱性染料结合，故细胞核的染色比细胞质为深。核中可见到1~3个染色较浅的呈球状的核仁。 2. 前期（prophase）：核较间期膨大，核内染色质逐渐螺旋化为丝状的染色丝，其后染色丝进一步缩短变粗，形成一定形态和数目的染色体（这时的每条染色体由两条染色单体组成，但在光镜下一般不易看清），核膜、核仁逐渐消失。??? ? 图 5-1 洋葱根尖有丝分裂 ? 3. 中期（metaphase）：染色体形态清楚，整齐地排列于细胞中央，形成赤道板。在赤道板的两面有许多纺锤丝连接细胞两极和染色体的着丝点，称为纺锤体，但不易观察到。洋葱的染色体数为16条，在有些中期细胞中清晰可数，有些细胞中因染色体重叠不易计数。 4. 后期（anaphase）：着丝粒纵裂为二。这时，每条染色体的两条染色单体已完全分开，由于纺锤丝的牵引，分别向细胞的两极移动，形成了数目相等的两组染色体。 5. 末期（telophase）：染色体移到两极并解旋为染色质，核膜、核仁重新出现，细胞中部出现细胞板，并逐渐向边缘发展。细胞板达到两端，分裂结束，一个细胞变为两个子细胞，细胞又进入间期状态。新形成的细胞较小，细胞壁不很完全。 二、动物细胞有丝分裂的观察 ??? 观察马蛔虫的子宫切片。取马蛔虫子宫横切片，置于低倍镜下观察，可见到马蛔虫子宫腔内有许多近圆形的、处于不同分裂时期的受精卵细胞（注意受精膜和围卵腔，马蛔虫受精卵最外层有较厚的受精膜，膜内有围卵腔，受精卵即悬浮于围卵腔中），