2-1植物组织与细胞培养技术课件.pptVIP

Please be quiet, 上课了！！ 第二章 植物组织与细胞培养 一、 植物组织培养定义 是指在无菌的条件下，将离体的植物器官、组织、细胞、胚胎、原生质体等培养在人工配制的培养基上，给予适当的培养条件，诱发产生愈伤，长成新的完整植株的一种实验术。 二 、发展历史 1、探索阶段（20世纪初至20世纪30年代） 1902年，德国植物学家哈伯兰德（Haberlanclt）就预言，植物细胞具有全能性，即高等植物的器官和组织可以不断分割，直至分到单个细胞的观点，并设想离体植物活细胞具有能够发育成为完整植株的潜在能力。 而且进行了相关实验：培养植物叶片细胞。 因此，被称为—— 植物组织培养的father 1943年,white 正式提出了植物细胞具有全能性的学说. 1948年，Skoog和催澄在烟草茎段和髓培养以及器官形成的研究中发现，腺嘌呤或腺苷可以解除生长素（IAA）对芽形成的抑制作用，而诱导形成芽，从而确定了腺嘌呤/生长素的比例是控制芽和根形成的主要条件之一。 1956年，Miller发现了激动素后，用它代腺嘌呤的效果更好。 1958年，在美国工作的英国人Stewward，从胡萝卜愈伤组织和细胞培养中，诱导分化产生了个体植株，给“全能性”理论以科学论证。 三、特点 1.培养条件可人为控制 2.生长周期短繁殖率高 3.管理方便，利于自动化 4.遗传品质一致 5.培养材料经济 6.误差小、重复性强 四、意义和应用 （1）能够有效保持优良品种特性 （2）获得无病毒植株 （3）快速繁殖新品种，加速优良品种推广 （4）节约耕地，提高农民产品产出率 （5）在遗传、生理生化和病理等研究上的应用 （6）便于运输与种质资源保存  植物组织培养是在无菌的条件下进行离体植物材料培养的技术。要达到无菌操作和无菌培养， 首先是要有一定的无菌环境，使用无菌的容器和用具（经过灭菌处理的）进行无菌操作，将无菌的植物材料接种在无菌的培养基上， 然后把要培养的植物材料放在一定的温度、湿度、光照、营养条件下，使其生长、发育和繁殖，这就必须要有一定的设备和条件。 （1）洗涤室 洗涤培养容器、小用具等，要求有工作台面、上水和下水，水池、培养容器摆放支架、电源、电热干燥箱等。洗涤室墙壁要有耐湿、防潮功能。 新购进的玻璃器皿首先要用1%左右浓度的稀盐酸将可溶性无机物除去，再用中性洗涤剂洗涤，一般器皿的洗涤可用洗衣粉洗涤，或用洗衣粉加热洗涤，用自来水冲洗干净。  （2）药品贮藏室 要求干燥、通风，避免光照，有存放各种药品试剂的药品柜、冰箱等设备，化学试剂、玻璃器皿等物品分类存放于柜中，有毒物品（HgCl2）需要专人密封保存，需低温保存的药品和药液放置于冰箱中贮藏，药品贮藏室紧邻化学称量室较好，便于工作。 （3）称量室（天平室） 要求干燥、密闭，无直射光照，避免腐蚀性药品和水气直接接触。有固定的水磨石平台，安放普通天平和万分之一分析天平（电子天平），要有电源插座，最好设计在阴面的房间，这样对怕光药品的保存和称量有利，称量室紧邻培养基配制室较好，以方便配制母液和培养基。如房间较少时，可以与药品储藏室合二为一。  （4）培养基配制室 主要进行培养基的配制、分装和灭菌前的暂时存放。配制的培养基需要实验台，上下水，电源，加热设备等。 配制培养基室要求备有各种试管、三角瓶、烧杯、量筒、吸管等玻璃器皿，有安放药品和器皿的各种橱架、水浴锅、过滤灭菌装置和酸度计等。 规模较小时， 可与洗涤室合并在一起。 （5）培养基灭菌室 器皿和培养基的消毒灭菌，最好在一个专用的灭菌室内进行。由于采用高温高压蒸汽灭菌方法，灭菌室最好有排除蒸汽的排风扇等。建筑上要求其墙壁耐湿、耐高温。 有用于干热灭菌的烘箱、湿热灭菌的高压蒸汽灭菌锅、蒸馏水器、水源、水池，供、排水设施。 有用于灭菌的两相和三相电源或煤气加热装置，摆放和存放器皿和培养基的架子和橱柜。 规模小时，可与洗涤室和配培养基室合并。 （6）培养基存放室 灭菌的培养基最好存放一段时间后进行接种工作，以防污染和损失苗木。 规模小时，可与洗涤室、配培养基室和灭菌室合并。 （7）过度室（缓冲室） 为避免进出时带进杂菌，无菌室外应该设置预备室，作为缓冲间。预备室和无菌室之间最好用玻璃墙隔离，便于观察和参观。 在预备室中可放置工作服、鞋、帽等，也需要安装自来水、水池和紫外灯，用于接种前的洗手和紫外灭菌，电源开关最好安装在预备室外边，以免在开关灯时紫外线对眼睛和皮肤造成伤害。 （8）接种室 无菌室的好坏对组织培养成功与否起重要作用。无菌操作室主要进行繁殖材料的表面灭菌和试管苗的继代培养和材料转接，要求室内干