hedgehog通路论文通路大肠癌环靶明RNA干扰.docVIP

hedgehog通路论文：干扰hedgehog信号通路对大肠癌细胞生长和凋亡的影响 【中文摘要】1、检测阻断hedgehog通路对大肠癌细胞SW480、caco2的影响。2、研究大肠癌细胞SW480、caco2中hedgehog激活机制的的差异。方法：1、培养人大肠癌SW480、caco2细胞,倒置显微镜下观察并记录细胞形态。2、加入不同浓度 40、30、20、10、5、2.5 μmol/L cyclopamine 环靶明 ,作用不同时间 24、48、72 小时后： 1 观察并记录细胞形态改变； 2 MTT法检测吸光度,代入公式计算细胞增殖抑制率；③Annxin-V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡百分率。3、设计并构建针对Gli1的miRNA干扰载体,转染SW480细胞,RT-PCR方法检测Gli1 mRNA表达；MTT法检测细胞增殖抑制率。结果：1、环靶明处理前后： 1 细胞形态变化：①未经处理大肠癌细胞系caco2形态呈梭形或多边形贴壁生长,细胞间隙较小；SW480细胞呈多边形或不规则三角形贴壁生长,细胞连接较为紧密。②环靶明作用24小时后,caco2细胞变短,细胞间隙变大,部分细胞,随药物浓度增加及作用时间延长,细胞形态变化更加显著,部分细胞失去胞增殖抑制率达83... 【英文摘要】:1. To research the effects of blockage of hedgehog signaling on proliferation,apoptosis of colorectal cancer cell sw480and caco2.2. To research the distinction of the activating mechanism on hedgehog signaling between sw480and caco2.Methods:1. cultivating sw480 and caco2 cell lines, observating cell morphous under inverted microscope.2.cells were treated with Cyclopamine: 1 observating cell morphous diversify, 2 cell proliferation was detected by MTT, 3 cell apoptosis was analysed by flow... 【关键词】hedgehog通路 大肠癌 环靶明 RNA干扰 【英文关键词】Hedgehog colorectal cancer Cyclopamine RNAi 【索购全文】联系Q1：1座机电话号码 Q2：1座机电话号码 【目录】干扰hedgehog信号通路对大肠癌细胞生长和凋亡的影响 中文摘要 5-7 Abstract 7 第1章 引言 11-12 第2章 材料与方法 12-22 2.1 研究对象 12 2.2 实验材料及仪器 12-14 2.2.1 材料 12-13 2.2.2 主要试剂的配置 13-14 2.2.3 主要仪器 14 2.3 方法 14-22 2.3.1 细胞培养 14-15 2.3.2 倒置显微镜观察细胞形态 15 2.3.3 MTT检测细胞增殖 15 2.3.4 流式细胞仪检测凋亡 15-16 2.3.5 pc DNA6.2-GW/EmGFP miR-Gli1干扰载体的构建 16-18 2.3.6 GlilmiRNA干扰质粒转染sw480细胞 18 2.3.7 RT-PCR筛选干扰效果最高的Gli1miRNA表达载体 18-21 2.3.8 检测干扰Gli1mRNA对细胞增殖的影响 21 2.3.9 统计学分析 21-22 第3章 结果 22-29 3.1 环靶明对细胞形态作用 22 3.2 环靶明对SW480、caco2细胞增殖影响 22-24 3.3 环靶明对大肠癌细胞系caco2凋亡的影响 24-26 3.4 重组质粒构建、测序、转染sw480细胞 26 3.5 转染pGli-1、p Gli-2对SW480细胞Gli1 mRNA影响 26-27 3.6 干扰Gli1对大肠癌细胞系SW480形态、增殖影响 27-29 第4章 讨论 29-31 参考文献 31-32 综述 32-40 参考文献 37-40 致谢 40