第八章 仪器分析法(多图).ppt

色谱法原理：一、吸附 混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同。 色谱法原理一、吸附 色谱法原理：二、分配 色谱法原理：三、分子筛 色谱法分类 从粗颗粒到细颗粒 各种加压泵 从玻璃柱到不锈钢柱 HPLC基本组成示意图 色谱柱 输液泵 检测器 检测器种类很多，现在最常用的是紫外检测器 进样器— 手动进样器 进样器— 手动进样器—六通阀 进样器 色谱工作站 色谱工作站 液相色谱仪器常见种类 high performance liquid chromatograph 液相色谱仪（2） 液相色谱仪（3） 液相色谱仪（4） 液相色谱仪（5） 液相色谱仪（6） 高效液相色谱法在药典中的使用 高效液相图谱 三、定性方法 定量方法 外标法 内标法 定量方法——外标法 HPLC操作注意事项 流动相严格过滤（0.45μm微孔滤膜），不要相信任何商家宣传的流动相已过滤的保证。 样品严格过滤。 流动相需经脱气处理。 例 内标液 取正三十二烷加正己烷溶解并稀释成1.0mg/ml溶液 对照液 精密称取VitE对照品0.2011g置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取 1~3ul注入GC仪，测定，计算 供试液 精密称取供试品0.1998g置棕 色具塞锥形瓶中，精密加入内标液 10ml，密塞，振摇使溶解，取1~3ul 注入GC仪，测定，计算 维生素E含量测定 对照液 供试液 药物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020* 基本原理 ： 色谱分离体系包括两个相，其中的一相固定不动，称为固定相；另一相是携带试样混合物流过此固定相的气体或液体，称为流动相。当两相作相对运动时，反复多次地利用混合物中所有组分性质的差异使彼此得到分离。两相及两相的相对运动构成了色谱法的基础。 药物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020* 气相色谱系统 ：主要由分离系统、检测系统和温度控制系统 药物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020* 系统适用性试验 药物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020* 1.基线和色谱峰 无试样通过检测器时，检测到的信号即为基线。 2.保留值 （1）时间表示的保留值 保留时间（tR）：组分从进样到柱后出现浓度极大值时所需的时间 死时间（tM）：不与固定相作用的气体（如空气）的保留时间。 调整保留时间（tR ＇）：tR＇= tR－tM 药物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020* 用来衡量色谱峰宽度的参数， 有三种表示方法： （1）标准偏差(?)： 即0.607倍峰高处色谱峰宽度的一半。 （2）半峰宽(Y1/2)： 色谱峰高一半处的宽度 Y1/2 =2.354 ? （3）峰底宽(Wb)： Wb=4 ? 药物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020* 塔板理论-柱分离效能指标 色谱柱长：L， 虚拟的塔板间距离：H， 色谱柱的理论塔板数：n， 则三者的关系为： n = L / H 理论塔板数与色谱参数之间的关系为： 药物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020* 分离度的表达式： R =0.8：两峰的分离程度可达89%； R =1.0：分离程度98%； R =1.5：达99.7%（相邻两峰完全分离的标准）。 药物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020* 测定方法 内标法加校正因子法（R：对照品 S：内标X：待测样品） 校正因子： 含量计算： 药物分析教研室 YAOWU JIANYAN JISHU 020* 按《中国药典》2010版（二部）的规定测定维生素E，做系统适用性实验时的数据如上表。 取维生素E对照品20.80mg(98.0%)，精密加入浓度为1.044mg/ml