DGGE胶配置和银染方法(GENOLAB).docVIP

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2017-06-08 发布于重庆
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DGGE胶配置和银染方法(GENOLAB).doc

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DGGE胶配置和银染方法(GENOLAB)

水平DGGE 选择35%-55%的水平DGGE的变性剂浓度范围，制备变性剂呈线性梯度增加，方向与电泳方向水平的水平胶，按照仪器使用说明进行操作。 35% 40% 55% 60% 40% Acrylamide/Bis 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 50x TAE buffer 0.3 mL 0.3 mL 0.3 mL 0.3 mL Formamide deionized 2.1 2.4 mL 3.3 mL 3.6 mL Urea 2.205 g 2.52 g 3.465 g 3.78 g dH2O To 15 mL To 15 mL To 15 mL To 15 mL 10% Ammonium Persulfate Ammonium persulfate 0.1 g dH2O 1 mL 50x TAE Buffer Reagent Amount Final Concentration Tris base 242.0 g 2 M Acetic acid, glacial 57.1 ml 1 M 0.5 M EDTA, pH 8.0 100.0 ml 50 mM dH2O 1,000.0 ml 电泳缓冲液温度为60℃，200 V预电泳10 min，每个加样孔加入含有等量加样缓冲液的PCR样品15 μL。在200 V电压下，电泳3 h。染色电泳结束后用银染法对DGGE胶进行染色。染色方法为： DGGE胶用固定液（乙醇，冰醋酸2.5）固定15 min Milli-Q纯水清洗，20 s和2 min各一次银染液（硝酸银1，37%甲醛0.75）染色15 min Milli-Q纯水清洗，20 s和2 min各一次显色液（氢氧化钠7.5，37%甲醛2.5）显色5-7 min 最后用终止液（乙醇50，冰醋酸2.5）终止反应北京市昌平区生命园路29号中关村生命科学园创新大厦B座215室邮编：102206 电话：+86 10 座机电话号码传真：+86 10 座机电话号码 1 / 1 Genolab Biotech Co., Ltd.