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2.2动物细胞工程 温故而知新——植物细胞杂交（马铃薯番茄） 植物组织培养 VS 细胞贴壁过程 接触抑制(contact inhibition) 自主阅读，p52第2自然段，思考下列问题： 1、什么叫动物细胞融合 cell fusion？ （概念要点） 2、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？两者的融合过程是否也一样？ 细胞融合方法 化学：PEG（聚乙二醇） 物理：电融合 生物：病毒（仙台病毒） 诱导细胞融合物质： 细胞电融合过程 B淋巴细胞与抗体的关系： 2、单克隆抗体McAb（概念） 如何大量生产单克隆抗体？ 利用淋巴细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞 如何筛选？ 融合方式？ 生产单克隆抗体需要那些物质和技术呢？ 单克隆抗体制备过程 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 杂交瘤细胞 细胞培养 筛选，继续培养 足够数量的、能产生特定抗体的细胞群 体外培养 注射到小鼠腹腔 单克隆抗体 诱导其融合的方法有哪些？ 两次筛选分别有什么目的？ 本过程利用了哪些原理？ 为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？ 单克隆抗体的应用 与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，灵敏度高，优越性十分明显。 应用主要有： 1、临床诊断 2、作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”治疗肿瘤 四、胚胎移植技术 试管动物（婴儿）培养过程 卵细胞 精子 体外受精 受精卵 胚胎 新个体 母体子宫内 孕育、产出 五、核移植技术 克隆羊培育过程 卵细胞 Ａ母绵羊 Ｂ母绵羊 乳腺细胞 细胞质 细胞核 细胞核移植 早期胚胎 卵裂 C母绵羊子宫 胚胎移植 多莉羊 分娩 妊娠 融合后的卵细胞 * 施 宇 复习回顾：植物细胞工程采用的技术手段有哪些？其理论基础是什么？ 所采用技术的理论基础 植物细胞工程 通常采用的技术手段 植物组织培养 植物体细胞杂交 植物细胞的全能性 融合的原生质体AB 再生出细胞壁 植物细胞的融合 杂种细胞AB 杂种植株 脱分化 愈伤组织 再分化 植物组织培养 原生质体B 原生质体A 去 壁 去 壁 人 工 诱 导 植物细胞A 植物细胞B 动物细胞可以融合吗？ 如果可以，两者相同吗？ 动物细胞工程 通常采用的技术手段 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体 胚胎移植 核移植 获得细胞的产物等 快速繁殖， 培育无病毒植株。 培养目的 培育成细胞系（株） 培养成植株 结果 液体、营养、 动物血清 （半）固体、营养、植物激素 培养基 细胞的增殖 细胞的全能性 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 思考：植物细胞工程中，除了植物组织培养技术外，还有什么技术？过程如何？ 动物细胞培养 一、动物细胞培养 从年龄看，材料动物有何特点，为什么？ 要将组织分散成单个细胞，可怎样处理？ 此处细胞在该生活环境中能无限生长和增殖吗？ 一般为幼龄动物或胚胎，分裂次数多。 可用胰蛋白酶处理使之分散成单个细胞。 不能。需要定期转移、分装培养。 一、动物细胞培养 1、过程： 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 胰蛋白酶 10代细胞 原代培养 50代细胞 传代培养 细胞株 无限传代 细胞系 单个细胞 加培养液 遗传物质未改变 遗传物质已改变 细胞株： 从原代培养细胞群中筛选出进行传代培养的细胞，能传到40-50代，其遗传物质没有发生变化。 细胞系： 传到40-50代后有部分细胞遗传物质发生了变化，带有癌变的特点，可能在培养条件下无限制的传代下去，这种传代细胞称为细胞系。 思考： 1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？ 主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。 独特之处有：1、液体培养基 2、成分中有动物血清等 2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？为什么要用胰蛋白酶做上述处理？ 3、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？ 成块组织不利培养和细胞分裂，分散了做成细胞悬浮液利于培养。 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体。 定义：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。 获得细胞 细胞的全能性 细胞株、细胞系 植物体 培养结果 或细胞分泌蛋白 快速繁殖、培育无病毒植株等 培养目的 动物血清 植物激素、琼脂 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基物理性质 细胞增殖 原理 动物细胞培养 植物组织培养