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EIA分析 取自 食品百科全书 跳转到: 导航, 有哪些信誉好的足球投注网站 酶免疫分析（Enzyme Immunoassay,EIA）是标记免疫分析中的一项重要技术,是以酶标记的抗体（抗原）作为主要试剂，将抗原抗体反应的特异性和酶催化底物反应的高效性和专一性结合起来的一种免疫检测技术。作为经典的三大标记技术之一,酶免疫技术在检验医学中得到广泛应用并不断得到更新，不断和其他先进技术如荧光、发光技术以及仪器自动化相融合，日臻完善,许多自动化仪器实际上是EIA技术和其他现代化技术的复合体，其分析敏感度已达到甚至大大超过放射免疫分析(Radioimmunoassay,RIA)的水平，因试剂稳定无放射性污染且分析形式日趋多样化，简易灵活，临床应用广泛而倍受重视。 1、酶免疫分析的技术进步 近年来，EIA技术取得了显著的发展，主要表现在以下方面： 1.1.继单克隆抗体后的第三代抗体基因工程抗体的应用，明显地提高了检测的特异性，基本消除了抗原、抗体间的非特异性交叉反应，保证了分析的准确性。抗体制备技术的进步，使试剂的生产制备得以规模化，检测范围日益扩展，小分子抗原、半抗原的检测成为事实。 1.2.分析方式的改进与多样化提高了试验的敏感性。 1.2.1.除早期的竞争法，间接法外，又发展了双抗原夹心法测抗体，偶联酶标记法测抗原，桥联酶免疫分析，酶放大免疫分析技术等，后者应用了生物素-亲和素系统，底物循环放大系统，酶-抗酶放大系统及酶偶联放大系统等。 1.2.2.由于酶标记技术的进步，标记酶的应用已从过氧化物酶，扩展到碱性磷酸酶，β半乳糖苷酶，尿素酶，葡萄糖6磷酸脱氢酶，葡萄糖氧化酶，苹果酸脱氢酶，至今有二十多种酶被应用于EIA ，但应用最多的仍然是辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase,HRP）和碱性磷酸酶（Alkalinephasphotase，ALP）。 1.2.3. 酶免疫分析与其它标记免疫分析相结合如与荧光免疫分析（Fluorescence Immunoassay ,FIA）结合形成荧光酶免疫分析（Fluorescence Enzyme Immunoassay ，FEIA），酶促放大时间分辨荧光免疫分析（Enzyme-am-plified time-resolved fluoroimmunoassay ，EATRFIA），EIA与化学发光免疫分析（Chemiluminescence immunoassay，CLIA）结合形成酶—化学发光免疫分析，增强化学发光酶免疫分析（ECLEIA）。EIA与聚合酶链反应结合形成的PCR-EIA分析等。 1.2.4.改进固相载体的技术 传统ELISA应用的固相载体是聚苯乙稀微孔板，聚苯乙烯珠或条，后发展为硝酸纤维素膜、活化滤纸、硅片、尼龙、利用高分子材料合成的各种固相微粒等。为提高固相表面的结合容量，增加结合物的范围而改造聚苯乙烯的表面，如用化学偶联法导入功能性醛基、酰基、烷胺基等以更好地与蛋白质，多肽的羧基结合，用位点导向性共价偶联法引入亲和素，蛋白A，多聚赖氨酸等，以牢固地捕获蛋白或多肽，超平整聚苯乙烯表面的制备，克服了表面粗糙带来的不均一性，达到平均粗糙度只有2A+的超平整平面，实现了对蛋白的结合容量大，脱附率低，孔间均一性好，使试验精密度达5%。应用于双抗体夹心法时，聚苯乙烯经射线照射后，可以增加其吸附性能特别是对免疫球蛋白的吸附性能。近年美国Corning公司研制成功表面经琥珀酰亚胺酯活化酶标板，其质量达到氨基活化相似水平。 1.2.5.分析方法的创新 如同步ELISA法测定多种抗体是将抗原包被在与微孔相匹配的钉板的钉子上，盖上钉板的同时与微孔内的所需标本、试剂反应，是又一种改良ELISA。利用抗体和抗抗体能形成多层复合物的特性，将常规二步温育法改为一步温育测定法，使检测时间大为缩短，现在已广为应用。 2. 酶免疫分析在方法学上与现代化技术的融合发展 酶免疫测定具有高度敏感性、特异性，而且它的试剂比较稳定，操作简单且无放射性危害，更由于现代生物学技术的发展，抗原抗体制备和酶标记技术的完善，特别是商品试剂盒的标准化和自动化仪器的应用，使其成为一种适用于各级检验部门的免疫标记技术。随着检验医学的不断发展，酶免疫测定不断与现代化技术的融合中得到发展。 2.1斑点-ELISA 斑点-ELISA的原理与ELISA的区别在于用对蛋白质有极强吸附力的硝酸纤维素膜代替塑料制品作为固相载体，酶作用底物后在硝酸纤维素膜上形成有色沉淀而使膜着色。它的灵敏度较一般ELISA高6～8倍、可达ng水平，试剂用量小，不需其它设备条件。 2.2免疫印迹法 免疫印迹法是将电泳与ELISA结合起来的一种方法，分为电泳、转印、酶免疫测定三个阶段。免疫印迹法结合了电泳的高分辨率和酶免疫测定的高敏感性和特