实验室常用溶液的配标准程序.docVIP

实验室常用溶液的配制标准程序 3 、 适用范围 XXXX研发部常用溶液：3M 醋酸钠、 2N NaOH 、 5M NaCL、 Solution Ⅰ 、 Solution Ⅱ Solution 、 Solution Ⅲ 、 LB培养基、 1M Tris-HCl 、 10 ×TE Buffer 、 10 × PBS Buffer 、 苯酚/ 氯仿/ 异戊醇 、 10%（W/V ）SDS 、 0.5M EDTA(pH 8.0) 、 50 ×TAEBUffer 、 20 ×SSC 、 封闭缓冲液（Wester杂交） 。 4 、 配制 4.1 、 用具 干燥洁净的200ml量桶一只，三角烧瓶两只，天平一架，250ml、1000ml广口瓶各一只。 4.2 、 配制步骤 4.2.1 、 配制NaAC溶液 ⑴用天平称取40.8克分析纯的NaOAC固体，置于250ml三角烧瓶中。 ⑵用100ml量桶准确取40ml去离子水，摇荡三角烧瓶使NaOH固体充分溶解 ⑶加去离子水将溶液定容到100ml ⑷高压灭菌后，室温保存。 4.2.2 、 配制NaOH溶液 ⑴用100ml量桶准确取80ml去离子水，置于250ml三角烧瓶中。 ⑵用天平称取8克NaOH固体缓缓加入三角烧瓶中。 ⑶摇荡混匀溶液。用去离子水将溶液体积定容到100ml。 ⑷将混匀的溶液转移入玻璃瓶中，室温保存。 4.2.3 、 配制NaCL溶液 ⑴用天平称取292.2克NaCL固体置于1L烧杯中，加入800ml的去离子水后搅拌溶解。 ⑵加去离子水将溶液定容至1L，适量分成小份。 ⑶高压灭菌后，4 0 C 保存。 4.2.4 、 配制 Solution Ⅰ 溶液 （1） 量取1M Tris-HCL(ph8.0) 25ml ,1.5M EDTA(ph8.0) 20ml , 20 %Glucose(1.11M) 45ml, dH 2 O 910ml , 置于1L烧杯中。 （2） 高温高压灭菌后，4 0 C 保存。 （3） 使用前每50 ml的 Solution Ⅰ 加入2 ml 的RNaseA（20mg / ml). 4.2.5 、 配制 Solution Ⅱ 溶液 (1) 量取10 %SDS 50 ml, 2N NAOH 50 ml, 置于500 ml 烧杯中。 (2) 加灭菌水定容至 500 ml,充分混匀。 (3) 室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。 注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。 4.2.6 、 配制 Solution Ⅲ 溶液 （1） 称量KOAc 147g, CH 3 COOH 57.5g， 置于500 ml 烧杯中。 （2） 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。 （3） 加去离子水将溶液定容 至 500 ml。 （4） 高温高压灭菌后，4 0 C 保存。 4.2.7 、 配制 LB培养基 （1） 称取T ryptone 10g, Yeast Extract 5g, NaCl 10g， 置于1L烧杯中。 （2） 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 （3） 滴加5 N NAOH（约0.2ml），调节ph值至7.0。 （4） 加去离子水将培养基 定容 至 1L。 （5） 高温高压灭菌后，4 0 C 保存。 4.2.8 配制 1M Tris-HCl(pH7.4,7.6,8.0) （1） 称量121.1g Tris置于1L烧杯. （2） 加入约800ml的去离子水。充分搅拌溶解。 （3） 按下加入70ml pH7.4, 60 pH7.6,42ml pH8.0浓盐酸调节所需要的值。 （4） 将溶液定容至1L。 （5） 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：使溶液冷却至室温后在调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的值大约降低0.03个单位。 4.2.9 、 配制1L 10 ×TEBuffer(pH7.4,7.6,8.0) 100mM Tris-HCl,10mM EDTA （1）量取溶液1M Tris-HClBuffer(pH7.4,,7.6,8.0)100ml,500mM EDTA(pH 8.0) 20ml，置于1烧杯中。 （2）向烧杯中加入800ml的去离子水，均匀混合。 （3）将溶液定溶至1L后，高温高压灭菌。 （4）室温保存. 4.3.10 、 配制 1L 10 × PBS Buffer 1370mM NaCl, 27mM KCl,10mM Na 2 HPO 4 ,20mM KH 2 PO 4 . （1）称量NaCl