化合物结构鉴定.docVIP

3.4 Fusarium sp. JN158紫色素的分离纯化 3.4.1 利用LC/MS对紫色素组分的分析 C 图3-11 紫色素溶液的HPLC(A)B) 及各组分的MS正离子图(C) Fig. 3-11HPLC (A), total ion chromatography (B) and MS spectra of purple pigment LC/MS技术是将液相色谱高效的在线分离能力与质谱的高选择性、高灵敏度的检测能力相结合，并且同时能得到化合物的保留时间、分子量与特征结构碎片等丰富信息，是组分复杂样品及微量样品分离分析最有力的研究方法。该紫色素的LCMS色谱图如图3-11所示。 由图可看出该色素有6个主要峰，分析时间大概是15 min这些主要峰基本达到基线分离，分离峰窄而高、峰形尖锐、无漂移。对出峰时间分别为2.67、3.14、3.64、3.74、4.18、5.36 min的化合物进行质谱扫描，然后通过Massly-nx V4.1软件进行分析，得到这6种组分的分子量分别为35、368.0、368.0、382.0、368.0、382.0发现这6种化合物的分子量之间相差14，其中3种分子量为368.0、2种分子量为382.0的应该是结构类似物。 3.4.2 利用HPLC对紫色素进行分离 本实验HPLC分离各组分图谱如图3-12所示。 图3-12 紫色素各组分的HPLC洗脱图谱 Fig3-12 Spectrum of the composition of the purple pigments by HPLC 本实验选用C18柱，对色素分离效果较好，由图可看出有6个峰，与LCMS分析的一致，分别标记成ⅠⅥ，Ⅵ峰相对最高，与周围杂峰距离也较远，，所以只对这进行了制备。 3.4.3 利用HPLC对色素样品进行纯度检测 将收集到的色素溶液集中，加NaOH沉淀，得到紫色的色素，用乙腈-三氟乙酸溶解后，用C184.6×250 mm)的分析柱对纯化后的色素进行纯度检验，结果如图3-13所示 图3-13 检测色素纯度的HPLC图谱 Fig3-13 Spectrum of detecting the pigment purity by HPLC 由图可看出，收集的色素Ⅵ纯度能达到95%以上，纯度满足要求。 3.6 Fusarium sp. JN158紫色素结构的鉴定 3.6.1 紫色素的紫外光谱分析 图3-21 紫色素的光谱扫描图 Fig. 3-21The spectrum of purple pigment 早期对有色的有机化合物研究发现，颜色的发生与分子中存在不饱和基团或体系有如C=C，C=O，-N=N-，苯环等，把这些基团或体系称为生色团。紫外光谱仅提供分子中的共轭体系和某些基团的结构信息。通过LCMS的分析，得到该色素的紫外吸收光谱如图3-21。由图可看出，该化合物在紫外区有两条吸收带，分别为253 nm和274 nm可初步判断该色素是一种带苯环的化合物。 3.6.2 紫色素的质谱分析 一级质谱主要是分析目标分子的分子量，该紫色素的质谱图如图3-22所示，从图可看出该色素的分子量为38。 图3-22 紫色素的正离子质谱图 Fig. 3-22The MS spectra of purple pigment 3.6.3 紫色素的红外光谱分析 图3-23 紫色素的红外光谱图 Fig. 3-23 The IR spectrum of purple pigment 红外光谱是记录有机分子吸收红外光后产生化学键振动而形成的光谱吸收，测定范围一般为4000～400 cm-1常用确定各种羧基、烷烃、芳环及炔烃等基团的特征吸收峰。基团频率区在4000～1300 cm-1之间，在1800 cm-1(1300cm-1)～600 cm-1区域内，除单键的伸缩振动外，还有因变形振动产生的谱带。O-H基伸缩振动出现在3650～3200 cm-1范围内；-CH2基吸收出现在2930 cm-1和2850 cm-1附近；C=O伸缩振动出现在1900～1650 cm-1范围内；苯的衍生物的泛频谱带，出现在2000～1650 cm-1范围，是C-H面外和C=C面内变形振动的泛频吸收；～酚的相应谱带在较高频率1200～1280 cm-1；醇的C-O出现在1000～1200 cm-1。结合图3-2，该紫色素的红外光谱分析结果汇总见表3-7。 表3-7 紫色素的红外光谱分析结果 Table 3-7 The IR spectrum results of purple pigment 红外吸收cm-1) 官能团 结构特征 3437, 1226 酚羟基 O-H伸缩振动 2926,1453, 1431 CH3 C-H反对称弯曲振动 1732, 161