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08生物制药综合实验 银杏外种皮中活性成分的提取与测定 ?指导教师： 王改玲 一、目的要求： 1．掌握中药成分系统预试的原理及方法。 2．掌握黄酮类化合物的一般提取方法及原理 3．掌握利用紫外可见分光光度计测定黄酮类化合物的一般方法 二、试剂与仪器： 试剂：芸香叶苷标准品，银杏外种皮。 丙酮、 乙醚（石油醚）、氯仿、乙醇、醋酸、氨水、吡啶 香草醛、浓HCI、无水硫酸钠、NaoH、醋酸镁、盐酸羟胺、氢氧化钾、FeCL3、镁粉、AICI3 、α-萘酚、醋酐、氯仿、浓硫酸、AgN03 、溴酚兰、明胶、铁氰化钾、碘化铋钾、碘、碘化钾、苦味酸、磷钨酸、亚硝酰铁氰化钠、3、5—二硝基苯甲酸、CuSO4 、茚三酮、亚硝酸钠、硝酸铝。 仪器：紫外可见分光光度计、粉碎机、烘箱、分析天平、恒温水浴锅、100ml 容量瓶、大量载玻片、大量小试管。 三、实验步骤 （一）系统预试 检品溶液的制备： A:中草药水浸液：取中草药碎块或粉末10g，加蒸馏水约100ml 70℃±水浴，浸渍10分钟，过滤，滤液供鉴别用。 B:中草药醇浸液：:取中草药碎块或粉末10g，加蒸馏水约100ml 70℃±水浴，浸渍10分钟，过滤，滤液供鉴别用。 各种成分检测 1、生物碱的鉴别 生物碱类成分（除有少数例外）均与多种生物碱沉淀试剂在酸性溶液（水液或稀醇液） 2、苷类的鉴别 （1）-萘酚试验（Molish）反应 （2）水解反应： （3）碱性酒石酸铜（斐林试剂Fehling’s test solution）试验 注：中草药对苷的一般鉴别是正反应，还可进一步作个别苷类的鉴定。具体方法如后。 A:蒽苷的鉴别 （1）与碱成盐显色反应（Borntrager反应）： （2）园形滤纸层析： B:黄酮苷的鉴别 浓盐酸镁粉 pbAC2 ③ 纸片法： C:强心苷的鉴别 （1）三氯化铁冰醋酸反应（Keller-Kiliani反应） （2）碱性3.5-二硝基苯甲酸反应（Kedde反应） （3）亚硝酰铁氰化钠反应（Legal反应） （4）碱性苦味酸（Baljet反应） D:皂苷的鉴别 （1）溶血试验：（2）泡沫试验： （3）醋酐浓硫酸试验（Liebermann-Burchard反应） （4）氯仿—浓硫酸试验（Salkowski反应） E:香豆素苷的鉴别 （1）内酯化合物的开环与闭环反应：。 （2）肟异羟酯酸铁试验 3、挥发油的定性鉴别 （1））观察其色泽，是否有特殊香气，及辛辣烧灼味感。 （2）挥发性 （3）pH检查 （4）FeCl3反应（检酚类）： （5）苯肼试验 （6）荧光素试验法： （7）香荚醛——浓硫酸试验： 4、鞣质类化合物的鉴别 （1）感观试验 （2）三氯化铁反应 （3）沉淀蛋白反应 （4）生物碱反应 二 银杏黄酮提取与测定 （1）银杏黄酮的提取 材料处理 回流提取 抽滤、定容 UV测定 （2）银杏黄酮的测定 标准曲线配置 标准曲线制作 未知夜中黄酮测定 四、实验结果与讨论