第九章特殊染色(二)说课.pptVIP

第四节 组织内铁、钙的显示 在某些病理情况下，细胞代谢所产生和沉着的色素，如脂褐素、黑色素、含铁血黄素、嗜铬、嗜银颗粒及组织内的微量金属离子等，则需要一些特殊染色加以证明。 一、含铁血黄素染色法 在慢性淤血的脏器组织内常有含铁血黄素沉着，一般易于同其它色素鉴别，但在不易区分的情况下可作铁反应加以证明。 含铁血黄素是由漏出于血管外的红细胞，被巨噬细胞吞噬后，分解血红蛋白产生的颗粒，HE染色为棕黄色，故称为含铁血黄素。因有时与福尔马林沉渣及黑色素等难相区别，故做含铁血黄素染色。 试剂配制： 1. Perls溶液 1%亚铁氰化钾，20%盐酸，用时等量混合，静置5min。 2. 0.5%碱性品红 1%碱性品红 0.5g 50%乙醇 100ml Perls氏普鲁氏兰反应： 石蜡切片脱蜡至水。 蒸馏水洗。 2%亚铁氰化钾、20%盐酸等量混合液（用前混合）处理15-20分钟。 蒸馏水洗。 0.5%碱性品红对比染色。 95%乙醇分化。 脱水、透明、封固。 结 果： 含铁血黄素呈蓝色（蓝黑色）。 应 用： 主要用于同其它色素鉴别，若为阳性，显示陈旧性出血。 注意事项： Perls氏溶液临用前新鲜配制，不宜久存再用。 Perls染色过程中，应避免用生锈及其它可能造成铁质的普通水洗，而应用蒸馏水洗。 二、钙的显示 组织中的病理性钙盐沉着多见于结核性干酪样坏死，脂肪坏死、各种组织坏死灶继肿瘤内，其性质多为磷酸钙，在HE染色中呈蓝色。 试剂配制： 1. 1%硝酸银 硝酸银 1g 蒸馏水 100ml 2. 2%硫代硫酸钠 硫代硫酸钠 2g 蒸馏水 100ml 染色步骤： 切片脱蜡之水 蒸馏水洗1次 1%硝酸银置于阳光处作用15-60min 蒸馏水洗2min 自来水洗5min 苏木精染核5min 水洗 1%盐酸乙醇分化 自来水洗10-15min余步同HE 染色。 结 果： 钙盐呈深黑色，细胞核染成蓝色，背景呈红色 第五节 神经组织染色 神经组织主要由神经元（神经细胞）和神经胶质细胞以及神经胶质纤维组成。 神经元是由细胞体和胞突（树突和轴突）构成。细胞浆内除含有一般细胞器----线粒体、高尔基体、溶酶体以及类脂质、色素外，更主要特征是神经原纤维和尼氏小体。 神经胶质分神经胶质细胞和神经胶质纤维。神经胶质细胞广泛分布于中枢及周围神经系统，由星形胶质细胞，少突胶质细胞和小胶质细胞几种，它们分别担负着支持作用，并参与代谢活动与修复功能。 神经组织用常规HE染色，对细微结构不易显示，对神经纤维，髓鞘则无法区别。 常用的特殊显示神经组织的染色有 一、Roger氏神经原纤维法 操作方法： （1）石蜡切片脱蜡至水。 （2）将切片投入2%氨酒精（2毫升氨水溶于100毫升95%酒精）中12小时或更长时间，后入80%酒精快洗一下。 （3）直接由蒸馏水入40%硝酸银溶液，在56℃温箱内放置15-20分钟(此液可以重复用，染色时间与温度有关)。 （4）在蒸馏水中洗一下。 （5）入20%中性甲醛5分钟，后入5%甲醛。 （6）以吸纸吸干，后滴入重氨银溶液1分钟。 （7）吸干，后放20%甲醛5分钟，或至切片呈锈橘黄色。 （8）用蒸馏水洗 ，再放入0.2%氯化金中15分钟，或至切片呈灰色。 （9）用蒸馏水洗，后固定于5%硫代硫酸钠中1/2分钟。 （10）常规脱水、封固。 结 果 神经原纤维呈黑色。背景灰紫色 重氨银溶液配法： 在20ml 120%硝酸银中滴入氨水，待至所产生的沉淀溶解为止，后加入10滴氨水和20ml蒸馏水。 神经原纤维呈细线状，存在于神经细胞体及树突中，它们形成一个稠密的网状，轴突中的原纤维也互相交织在一起，且伸延至轴突全长。在HE染色中呈粉红色，难与胶原纤维相区别，故须作神经纤维染色。 应用： （1）有利于观察神经原纤维的损伤。 （2）神经系统肿瘤的诊断与鉴别诊断：如神经母细胞瘤与未分化癌的区别等。 二、尼氏小体染色 尼氏小体是神经细胞内的一种物质，当神经细胞病变时，尼氏小体迅速减少和消失。 试剂配制： 1%甲苯胺蓝水溶液 甲苯胺蓝 1g 蒸馏水 100ml 染色步骤： 1. 脱蜡至水 2. 放入50-60度的1%甲苯胺蓝水溶液 20-40min 3. 蒸馏水洗 4. 95%乙醇分化 5. 无水乙醇脱水 6. 透明、封片 染色结果： 尼氏小体呈紫蓝色，细胞核