动物细胞培养和核移植技术(上课用)111精讲.ppt

二、动物细胞培养条件 二、动物细胞培养条件 * 动物细胞工程常用的技术手段： 动物细胞培养技术 动物细胞核移植技术 动物细胞融合技术 生产单克隆抗体技术 ----基础 一、动物细胞培养 （一）概念P44： 从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 （二）原理： 细胞增殖 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 原代培养 单个细胞 剪碎，再用胰蛋白酶/胶原蛋白酶处理 加培养液 传代培养 胰蛋白酶 （三）动物细胞培养过程： 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 1、选材： 优点：细胞分化程度低，分裂能力强， 容易培养。 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 单个细胞 胰蛋白酶/胶原蛋白酶 2、分散的单个细胞的原因： 与培养也充分接触，易摄取养分，排出代谢废物； 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 原代培养 单个细胞 胰蛋白酶 加培养液 3、动物细胞生长特点： 要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 ①细胞贴壁： ②接触抑制： 传代培养 胰蛋白酶 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 原代培养 单个细胞 胰蛋白酶 加培养液 4、原代培养： 消化后的初次培养（分瓶前）或10代以前的培养。 5、传代培养： 分瓶后的培养。 传代培养 胰蛋白酶 传代培养的细胞一般传至10代就不易传下去 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 原代培养 50代细胞 单个细胞 胰蛋白酶 加培养液 从原代培养细胞群中筛选出进行传代培养的细胞，能传到50代左右，其遗传物质没有发生变化,这种传代细胞称为细胞株。 6、细胞株：10-50代 传代培养 细胞株 遗传物质未变 胰蛋白酶 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 原代培养 50代细胞 单个细胞 胰蛋白酶 加培养液 传代培养 细胞株 细胞系 传到50代左右后有部分细胞遗传物质发生了变化，带有癌变的特点，可无限制的传代下去，称为细胞系。 7、细胞系： 遗传物质未变 遗传物质已变，细胞发生癌变，获得不死性，失去接触抑制 胰蛋白酶 注：动物细胞培养不能最终培养成生物体 原代培养 传代培养 目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内，以保持细胞正常的二倍体核型。 1、无菌、无毒的环境 对培养液和培养用具进行无菌处理 在培养液中添加一定量的抗生素 定期更换培养液 2、营养（液体培养基） 有机物：葡萄糖、氨基酸、促生长因子 无机物：无机盐、微量元素 天然成分：血清、血浆。 CO2：维持培养液的PH 3、温度和PH 36.5±0.5℃ 7.2~7.4 4、气体环境： （95%空气和5% CO2 ） O2：细胞代谢所必需的 *