第9章胚胎培养与人工种子概念.pptVIP

第九章  植物胚胎培养与人工种子 （二）胚乳培养的关键 A、胚乳发育时期的影响 发育早期胚乳：操作不便，诱导率低 游离核期或刚转入细胞期的核型胚乳：难得callus 旺盛生长期胚乳：易诱导产生callus ★ 旺盛期胚乳特征 §胚已分化完成 §胚乳已形成细胞组织 §充分生长，达到成熟大小 §外观为半透明的固体状 §富有弹性 水稻：授粉后4 d 黑麦草：授粉后8 ~ 10 d 黄瓜：授粉后7 ~ 16 d 梨：授粉后20 d 大麦：授粉后10 ~ 20 d 玉米和小麦：授粉后8 ~ 12 d 一些草本植物胚乳培养的适宜取材时期 一般情况下：接近成熟或完全成熟的胚乳callus诱导率很低，甚至无callus 木本植物，如：桑寄生科、檀香科植物，其成熟胚乳和诱导产生callus B、培养基和激素的影响 培养基：MS、B5、MT、White、LS等 水解酪蛋白、酵母提取物也很必要 激素：要求特殊 大麦胚乳只有在添加2，4-D的培养基上才能生长 猕猴桃胚乳培养中，玉米素最好 枣的胚乳培养中，激素似乎无特殊要求 C、其他因素的影响 蔗糖浓度：3% ~ 5% 温度：25℃ pH值：如 玉米 6.1 ~ 7.0 ； 苹果 6.0 ~ 6.2等 （三） 培养方法： A、取授粉4-8d后的幼果，常规消毒 B、无菌条件下切开果实，取出种子，分离出胚乳 C、接种在培养基上，在25-27℃和黑暗条件或散射光下培养形成愈伤组织 D、转到分化培养基上，待愈伤组织长出芽后，切下不定芽 E、插入生根培养基中，光下培养10-15d，切口处长出白色的不定根 ※两种植物胚乳培养的方法 A、枸杞 开花20d的枸杞胚乳 MS + 2，4-D 0.2mg/L 生根 MS 分化出苗 MS + BA 0.2mg/L 不同倍性的胚乳植株 callus B、葡萄 取出种子 切去合点部分 接种 White + CM10% + 2，4-D 2.0 + CH 500 +KT 1.0 + 蔗糖 3%~4% 琼脂8% 1个月，胚乳愈伤组织长大，胚解体 未授粉胚珠和子房培养是离体受精的基础，可诱发大孢子发育成单倍体植株，且孤雌产生的单倍体植株获得率较孤雄生殖高。 胚珠培养中，已授粉具有球形胚或更后期的胚珠易培养成种子，且培养基及添加成分相对要求不高。而受精不久的胚珠则需要成分复杂的培养基，培养难度大。 五、胚珠和子房培养 1、胚珠培养的意义 有利于合子和早期原胚的培养 胚分化不全的种子的胚培养 获得杂交后代和优良品种 离体授粉的需要 获得无病毒苗 （一） 胚珠培养 不同植物的胚珠形态结构 2、胚珠培养的方法 长度小于3mm的胚珠，难与直接解剖，可先接种于液体培养基中，根据培养情况采取相应培养条件。 （二） 子房培养 1、子房培养的意义 ★有效地挽救杂种胚的败育 ★单倍体植株的培育 ★离体授粉的需要 ★离体条件形成果实 ★花被功能研究 2、子房培养的方法 授粉或授粉后的子房 表面消毒 接种培养 受精后的子房仍需进行表面消毒后再接种。而未受精子房可将花被表面消毒后，在无菌条件下直接剥取子房接种。 子房培养只需较简单的培养基即可形成果实，并含成熟种子。 六、植物离体授粉受精 离体受精技术的突破的技术前提： a、雌配子和雄配子分离技术 b、单对原生质体融合技术 c、微培养技术 开花前数天套袋，开花前一天或当天取花蕾或花药，表面消毒后，无菌条件下收集花粉。 采用直接引入法、注射法进行子房试管授粉，或者是采用哺育法、接近法进行胚珠试管授粉。 1、离体受精方法 胚珠 花粉 试管内授粉 10d后 胚珠培养 3周后 离体受精及植株再生过