溶液各种配制资料.doc

附录：常用试剂配制及应用 一、常用缓冲液、试剂的配制 碳酸盐缓冲液(Carbonate-Bicarbonate Buffer) 由于碳酸盐pH值偏碱，因此，常用于pH9的缓冲液配制（附表1）。 附表1. 0.2 mol/L碳酸盐缓冲液（pH9.2～10.7） pH0.2mol/L Na2CO3 (ml)0.2mol/L NaHCO3 (ml)pH0.2mol/L Na2CO3 (ml)0.2mol/L NaHCO3 (ml)9.24.046.010.027.522.59.37.542.510.130.020.09.49.540.510.233.017.09.513.037.010.335.514.59.616.034.010.438.511.59.719.530.510.540.59.59.822.028.010.642.57.59.925.025.010.745.05.0磷酸缓冲液(Phosphate Buffers，PB) 磷酸盐是使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个pKa 值，所以用它们配制的缓冲液，pH 范围最宽。NaH2PO4：pKa1＝2.12，pKa2＝7.21； Na2HPO4：pKa1＝7.21，pKa2＝12.32。 另外，磷酸盐还有钾盐分子形式，一般来说，低温时钠盐难溶，钾盐易溶，因此，配制细胞培养用试剂时常常添加钾盐试剂，但若配制十二烷基硫酸钠（SDS）-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用钠盐而不能用钾盐，因为SDS会与磷酸钾生成难溶的十二烷基硫酸钾。 磷酸缓冲液的优点为：①可配制成不同离子强度的缓冲液；②适用pH缓冲范围较宽；③受温度影响缓冲液pH值变化较小；④离子强度对缓冲液pH影响较小，如0.1mol/L缓冲液稀释10倍其pH变化小于0.1。 磷酸缓冲液的缺点是：①磷酸盐易与钙离子（Ca2+）、镁离子（Mg2+）及重金属离子结合生成不溶的沉淀物；②可能干扰某些 HYPERLINK / 生物化学反应过程，如对某些酶的催化活性具有一定程度的抑制作用。 NaH2PO4的pH值偏酸性，可用作pH4的缓冲液。 Na2HPO4的pH值偏碱性，可用作pH10的缓冲液。 而pH＝6～8的中性缓冲液是更常用的缓冲液，需要NaH2PO4与Na2HPO4两种磷酸盐混合配制（附表2）。 附表2. 0.2 mol/L磷酸盐缓冲液（pH5.7～8.2） pH0.2mol/L NaH2PO4 (ml)0.2mol/L Na2H PO4 (ml)pH0.2mol/L NaH2PO4 (ml)0.2mol/L Na2H PO4 (ml)5.793.56.57.039.061.05.892.08.07.133.067.05.990.010.07.228.072.06.087.712.37.323.077.06.185.015.07.419.081.06.281.518.57.516.084.06.377.522.57.613.087.06.473.526.57.710.589.56.568.531.57.88.591.56.662.537.57.97.093.06.756.543.58.05.394.76.851.049.08.14.295.86.945.055.08.23.097.0磷酸盐缓冲溶液（Phosphate-buffered saline, PBS) 磷酸盐缓冲液是在磷酸缓冲液基础上添加NaCl以维持溶液的渗透压，因此，PBS适用于做细胞缓冲液，常用PBS配制如下。 NaCl 8g KCl 0.2g Na2HPO4 1.44g KH2PO4 0.24g 在800ml蒸馏水中溶解，用HCl调节溶液的pH值至7.2～7.4加水定容至1L，15psi（1.05kg/cm2）高压灭菌20min，室温保存备用。 Tris缓冲液（Tris-HCl Buffer, TB） Tris的pH值偏于碱性，因此，通过添加HCl调节pH至所需值，Tris-HCl缓冲液的离子强度（mol/L）是专指Tris的浓度，如某一特定pH的0.05 mol/L Tris缓冲液的配制是将50ml 0.1 mol/L Tris碱溶液与附表3所示相应体积（ml）的0.1 mol/L HCl混合，加