化学发光法概念.pptVIP

化学发光分析法;基本原理 常用的化学发光物质 仪器装置 影响化学发光的因素 定性定量分析;化学发光（chemiluminescence）：又称为冷光，它是在没有任何光、热或电场等激发的情况下由化学反应而产生的光辐射。;一、基本原理;化学发光反应机制 在化学反应过程中，某些反应产物由于吸收了反应产生的化学能，由基态跃迁至较高电子激发态中各个不同能级，然后经过振动弛豫或内转换到达第一电子激发态的最低能级，由此以辐射的形式放出能量跃回到基态。在个别情况下，它可以通过系间跃迁到达亚稳的三重态，然后再回到基态的各个振动能级，并产生光辐射，这两种光都是化学发光。 A +B = C + D*（激发态分子） D* → D + h?（激发态分子D* 的光辐射） ;化学发光反应的条件 能快速地释放出足够的能量。能产生化学发光的物质大多为有机化合物，芳香族化合物；化学发光反应多为氧化还原反应，激发能与反应能相当 ，?E=170～300 kJ/mol；发光位于可见光区； 处于激发状态的分子或原子必须能够放出光子，或者能够转移它的能量到另一个分子上而使此分子被激发。;2.化学发光效率和发光强度;发光强度;二、常见的化学发光剂;鲁米诺早在1853年就被合成出来了。1928年，化学家首次发现这种化合物有一个奇妙的特性，它被氧化时能发出蓝光。 刑侦学应用 在检验血痕时，鲁米诺与血红素（hemoglobin，血红蛋白中负责运输氧的一种蛋白质）发生反应，显出蓝绿色的荧光。这种检测方法极为灵敏，能检测只有百万分之一含量的血。;鲁米诺(luminol)（又名发光氨）;;合成;发光体系;鲁米诺-H2O2的反应是自身化学发光反应;应用;鲁米诺-KIO4体系;在免疫分析中的应用;该分析系统采用辣根过氧化物酶（HRP）标记抗体(或抗原)，在与反应体系中的待测标本和固相载体发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶（HRP）标记抗体复合物，这时加入鲁米诺发光剂、H2O2和化学发光增强剂使产生化学发光。; ;过氧化草酸酯的化学发光反应体系;（2）草酸酯-H2O2体系：主要用于测定那些酶反应产物为H2O2的酶底物，如葡萄糖、氨基酸等。 改变H2O2用量，对体系发光强度影响不大，由于H2O2具有易分解性质，一般H2O2用量为草酸酯3~4倍。 ; （3）草酸酯-过氧化氢-荧光待测物体系：用于测定某些具有荧光或其衍生物具有荧光的组分进行分析测定，如环孢素A、儿茶酚胺、类固醇、地塞米松等。;酸性高锰酸钾 具有很强的氧化能力，可以与多种无机物和有机物进行氧化还原反应，但由于其反应的发光强度较弱，所以知道20世纪70年代以后，伴随着微弱光检测技术的发展才得到广泛的研究和应用。 ;酸性高锰酸钾体系;四价铈 可直接与多种还原性无机物或者有机物放生氧化还原反应，是强氧化性化学发光剂之一。发光体系虽然简单，但由于不收Cl-的影响，更合适水样中有机物污染的检测。 ;四价铈体系;吖啶酯化合物：该化合物是应用最广泛的化学发光剂之一。代表性物质为光泽精，在碱性介质中，光泽精-H2O2金属离子、还原性化合物以及产生H2O2基质或酶的测定。;三 仪器装置; 装置流程：;化学发光仪;LUM-F流动注射化学发光仪器;;四、影响化学发光的因素;（一）化学发光体系的选择;依据待测组分的性质，选择相适应的化学发光体系 化学发光反应多为氧化还原反应(1);依据待测组分的性质，选择相适应的化学发光体系 化学发光反应多为氧化还原反应(2);如果是建立新的发光体系，则以简单、高效为原则。首先考虑化学发光剂-待测物体系，确定测量波长。然后对体系的溶剂、缓冲剂进行筛选，最后再筛选催化剂和增敏剂。;（二）PH;（三）反应体系中各试剂的浓度;（四）样品溶液中的共存组分;五、定性定量分析;样品中待测组分测量分析的研究方向;耦合反应;标记技术;分离技术;谢谢！