植物脱毒技术研讨.pptVIP

植物组织培养; 第八章;为什么要培育脱毒苗;目前受病毒为害严重的作物有： 大田作物：马铃薯，烟草，甘蔗 蔬菜：白菜，大蒜，番茄，萝卜 果树：柑橘，苹果，草莓，香蕉 花卉：菊花，天竺葵，紫罗兰;什么叫无病毒苗;花叶心腐病 ;烟草黄瓜花叶病毒“脉坏死症”; 第一节 脱毒方法; 病毒侵染到植株的叶片后,经过一段时间,即向附近细胞增殖转移,转移速度很慢,每小时只有几微米.当叶片内病毒浓度增大到一定量时,就转移到韧皮部,随后通过维管束转移到其他部分。 由于植株生长点附近病毒的浓度很低，甚至没有。所以，应用茎尖培养可以获得脱毒苗。 由于茎尖培养脱毒效果好，后代遗传性稳定，所以是目前生产上最常用的脱毒措施。 ;为什么茎尖培养能够除去病毒？;1.在一个植物体中，病毒易于通过维管系统而移动，但在茎尖分生组织中不存在维管系统。;4.倘若在植物体内确实存在着“病毒钝化系统”的话，它在分生组织中应比任何区域都有更高的活性，因而分生组织不受病毒的侵染。;茎尖长(mm);注意： 不同种类的病毒，切取茎尖的大小也不相同 马铃薯X病毒，切取茎尖长度0.2-0.5mm茎尖培养，除可除去病毒外，尚可除去其他病原体; 马铃薯Y病毒，切取茎尖长度1.0-3.0mm.;（一）茎尖剥离 取幼苗茎尖2-3cm小段，剥去可见大叶，放在烧杯内，用自来水冲洗1小时左右，移入无菌室进行严格消毒，先用75%酒精快速浸泡一下，再放入5%的漂白粉溶液内消毒7-10min,然后用无菌水冲洗3-4次。在双筒解剖镜下剥去幼叶，最后露出圆滑的生长点，用注射的针头侧刃或自制的解剖针，仔细地切取带有1-2个叶原基的生长点，随即接种到三角瓶内的培养基上进行培养。;;;（二）培养条件;（二）生根诱导; （二）培养基 常用MS或White培养基。在培养基中可酌情加5%-10%椰乳，0.1-1.0mg/L的IAA、NAA、6-BA等，有的还要加活性炭。 ;二、其他组织培养脱毒;（1）原理及依据 a、愈伤组织细胞分裂增殖速度快，而病毒复制速度较慢，赶不上细胞的繁殖； b、愈伤组织细胞发生了抗病毒突变。;（2）技术关键 诱导再生植株的愈伤组织 （3）操作程序 植物各种器官或组织诱导产生出愈伤组织，愈伤组织多次继代，然后从愈伤组织再诱导分化芽，长成植株。 愈伤组织培养脱毒法脱毒效果不定，常出现一些变异。;二、珠心胚培养脱毒法 病毒是通过维管组织传播，而珠心组织和维管束系统无直接联系，故可以通过珠心组织离体培养获得无病毒植株。;三、微尖嫁接脱毒 把无病毒的茎尖作为接穗嫁接到在人工培养基上生长的实生苗砧木上，然后将嫁接后的砧木接种到新的培养基上培养。 微尖嫁接要求的剥离技术高，嫁接成活率与接穗大小呈正相关，而脱毒率与接穗大小呈负相关;四、花药培养脱毒 草莓花药培养可以产生无病毒植株。草莓花药培养脱毒率高于茎尖脱毒率，一般可以达到80%以上，有些报道指出可以达到100%。;三、理化方法脱毒;1、物理方法;1.高温处理原理 病毒和寄主对高温的忍耐能力有差异，在一定的高温下，病毒失活而寄主存活。 　;(1)温汤处理;(2)热空气处理;热处理方法主要缺陷是并非能脱除所有病毒。 例如在马铃薯中，应用这项技术只能消除卷叶病毒。 而且对寄主植物作较长时间的高温处理有钝化植物组织中的阻抗因子，致使寄主植物抗病毒因子不活化，从而增加无效植株的发生率。因此热处理需与其他方法配合应用，才可获得良好的效果。 ;又称冷疗法。 如菊花在5℃条件 下分别处理4个月或7.5个月，没有菊花矮化病毒（CSV）的无病毒苗分别是67%和73%。;2、化学处理;第二节 脱毒苗的鉴定;一、直接检测法;二、指示植物法;草本指示植物鉴定;来源：最早是美国的病毒学家Holmes 1929年发现的。他用感染TMV的普通烟叶的粗汁液和少许金刚砂相混合，然后在烟叶子上摩擦，2~3d后叶片上出现了局部坏死斑。 这种方法条件简单，操作方便，故一直沿用至今，仍为一种经济而有效的鉴定方法。;指示植物一般有两种类型： 一种是接种后产生系统性症状，其病毒可扩展到植物非接种部位，通常没有局部病斑； 另一种是只产生局部病斑，常由坏死、褪绿或环状病斑构成。 ;操作步骤;小叶嫁接法;2.木本指示植物鉴定;三、抗血清鉴定法;1.块茎沉淀法;2.酶联免疫鉴定法;;四、分子生物学鉴定法;五、电镜检测法;第三节 无病毒苗的保存和繁殖;一、无病毒苗的保存;二、无病毒苗的繁殖;注意;三、无病毒苗的利用;四、植物脱毒的意义;2.防止品种退化;无病毒苗可以表现出明显的优良效果。 如草莓可