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植物DNA的提取与鉴定研讨
;;植物DNA的提取与鉴定 ;植物DNA的提取与鉴定 ;实验原理; 2.CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸.通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。 （CTAB法的全称是十六烷基三甲基溴化铵法（Hexadecyltrimethy Ammonium Bromide）。;实验试剂;实验器材;;;实验步骤;5，置于65℃的水浴槽或恒温箱中，每隔10 min轻轻摇动，30~60min后取出； 6，冷却2 min后，加入氯仿-异戊醇（24：1）至满管，充分混匀2~3 min 7，放入离心机中10000 rpm离心10 min，与此同时，将600 ul的异丙醇加入另一新的灭菌离心管中； 8， 10000 rpm离心1 min后，移液器轻轻地吸取上清液，转入含有异丙醇的??心管内，将离心管慢慢上下摇动30 s，使异丙醇与水层充分混合至能见到DNA絮状物；;9，10000 rpm离心1 min后，立即倒掉液体，注意勿将白色DNA沉淀倒出，将离心管倒立于铺开的纸巾上； 10, 60 s后，直立离心管，加入720ul的75%乙醇及80 ul 5 M的醋酸钠，轻轻转动，用手指弹管尖，使沉淀与管底的DNA块状物浮游于液体中； 11，放置30 min，使DNA块状物的不纯物溶解； 12，10000 rpm离心1 min后，倒掉液体，再加入800 ul 75%的乙醇，将DNA再洗 30 min； 13，10000 rpm离心30 s后，立即倒掉液体，将离心管倒立于铺开的纸巾上；数分钟后，直立离心管，干燥DNA（自然风干或用风筒吹干）； 14，加入50 ul 0.5 × TE(含RNase)缓冲液，使DNA溶解，置于37℃恒温箱约15 h，使RNA消解;植物DNA的鉴定;注意点;;思考;; 4.用乙醇沉淀DNA时，为什么加入单价的阳离子？ 减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。;
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