速测课件.ppt

河池市2012年农产品质量安全监管工作暨农产品质量安全检测技术培训会 河池市2012年农产品质量安全检测技术培训会 蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测 河池市农产品质量安全检测中心 主要内容 快速检测方法流程 快速检测技术关键点 博纳CL-BⅢ四通道 残留农药测定仪使用方法 酶抑制率法检测原理 在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。 正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用农残速测仪测定抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。 所需试剂 提取试剂：pH 8.0 缓冲液 胆碱酯酶：乙酰胆碱酯酶或丁酰胆碱酯酶 显色剂：二硫代二硝基苯甲酸 底物：碘化硫代乙酰胆碱 可选用由以上试剂制备的试剂盒 快速检测流程图 快速检测技术关键点 采样要求 样品制备 试剂的配制与保存 检测过程 采样要求 随机抽取（基地、市场）, 每种样本至少取0.5-1.0kg, 要求具有代表性。 抽检样本要详细记录。如蔬菜种类、抽检地点、时间、蔬菜来源、批发商等，保证可追溯性。 抽取的样品应放入塑料袋中，装入样品后的塑料袋要密封，样品袋一旦打开后不能恢复原状。 样品制备 选取包含大、中、小个体具有代表性的蔬菜，擦净表面泥土，用取样器扦样或剪成1cm见方碎片，待用。 果菜（番茄、茄子、辣椒）和瓜类（黄瓜、西葫芦）菜：从果实对称部位取果皮，切成见方小块，称取1g测定。 豆类菜（包括：菜豆、豇豆、荷兰豆等）：选取多根菜豆，从中截取一段，再切成小段，混匀，称取1g测定。 叶菜、普通油菜：用取样器从叶片部位取样，称取1g测定。 花椰菜和西兰花：取花球部分，切成小块，称取1g测定。 大白菜、甘蓝、球生菜：选取3至5棵菜，用取样器从蔬菜对称位置从表面穿至1-1.5cm处取样，混合均匀，称取1g测定。 试剂的配制与保存 酶的要求 以3min后与3min 前空白吸光值的差值即△Ac在0.4～0.8之间为佳（国标为0.3以上）。 粉状的酶应储存在冷冻室内,用缓冲液溶解后应储存在0℃～5℃冷藏室内,在一周内用完；溶后暂时不用的酶要保存在冷冻室内,用时解冻,解冻后一周内用光,不要反复解冻,否则会影响酶的活性。 底物与显色剂 现配现用，摇匀置4℃冰箱中保存。底物保存期不超过2周。 在使用过程中避免交叉污染，观察试剂颜色是否正常。 检测过程 使用移液枪时，避免溶液吸空或推液不尽导致所取溶液体积不准，造成数据不准确。 温度对酶的活性和稳定性影响很大，因此实验必须在恒温条件下进行，使空白和样品的反应温度一致，避免实验误差。 检测过程 不同酶抑制时间影响酶的抑制率。随着酶抑制时间的延长，抑制率也随之提高。所以实验操作中必须控制酶抑制时间，使空白与样品的反应时间完全一致。 比色皿的使用：注意手不要摸比色皿的光面，要拿毛面，光面对准光路。 比色皿的液体要超过三分之二，且不要溢出，要保持光面外侧的洁净。 博纳CL-BⅢ四通道残留农药测定仪使用方法 标准对照库 土豆、胡萝卜、香菜、生姜、芦蒿、山药、 木耳菜、紫色甘蓝、芹菜、蒜苔、桔子、 萝卜、茄子、茼蒿、水培生菜、小葱、蒜、 蘑菇、辣椒、白菜、柚子、黄瓜、甘蓝、 油菜苔、橙子、蒜苗、红薯、梨、西红柿、 大葱、大白菜、洋葱、韭菜 谢谢大家 开始样品分析 * * * 黄雪琳 提取液 显色剂 底物 酶液 取样（1g）、切碎 ? 加入5ml提取试剂，震荡1-2min，静置待用 于试管中加入2.5ml样本提取液、0.1ml酶液、0.1ml显色剂，摇匀，在37-38℃下放置15min ? 加入0.1ml底物摇匀，放入仪器进行测定 注：对照组用2.5ml提取试剂代替样本提取液 开始对照分析 开始对照分析 装入对照样例 * *