实验1-大肠杆菌的培养和分离汇总.pptVIP

③将玻璃刮刀放在酒精灯火焰上灼烧，待玻璃刮刀冷却后，在酒精灯旁打开培养皿，将菌液涂布到整个培养基表面。 ④将培养皿倒置，在37℃恒温箱中培养24~48 h。 ④恒温培养箱中培养 恒温培养箱 结果：以每个培养皿中有20个以内的单菌落最为合适。 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 倒平板 平板划线分离 练一练，识一识 稀释涂布分离 接种环 玻璃刮刀 例题：要获得遗传特性单一的大肠杆菌菌种，一般必须对原有的大肠杆菌菌种进行扩大培养，并利用纯化技术得到单菌落的菌种。请回答下列有关大肠杆菌的培养和分离实验的相关问题： （1）对买回来的大肠杆菌菌种进行扩大培养，一般用LB培养基，在培养基中为微生物提供碳源、氮源和能源的物质主要是　　　　　　　　　　，为调节渗透压，要加入一定量的　　　。为进行大肠杆菌的分离，还要加入 配制成固体培养基，并进行倒平板的操作。 蛋白胨和酵母提取物 氯化钠 琼脂 * 第一章 微生物的利用 实验1 大肠杆菌的培养和分离 什么是微生物？ 乳酸杆菌 黑曲霉 微生物：结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物。 什么是培养基？ 三角瓶 培养皿 试管 液体培养基：扩大培养，工业生产。 固体培养基：分离纯化，鉴定菌种，计数，保藏。 凝固剂：琼脂 培养基的配制 功能和来源 生长因子 碳源 无机盐 水 氮源 营养成分 提供碳元素：主要是糖类 提供氮元素：蛋白胨、牛肉膏、尿素 维生素、氨基酸和含氮碱基 H2O，良好的溶剂 NaCl：维持一定的渗透压 LB 培养基的配制 LB固体培养基：蛋白胨 0.5g，酵母提取物 0.25g，氯化钠 0.5g，加水50 mL，琼脂 1g。调节pH 至7.6。 封口膜 菌落：单细菌的克隆 菌落：在固体培养基上，由单个细菌繁殖而来的一个肉眼可见的具有特定形状的子细胞群体。 霉菌 大肠杆菌 菌落的作用：鉴定菌种的重要依据 菌落特征：菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等。 大肠杆菌 大肠杆菌：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。 怎样无菌操作？ 高压蒸汽灭菌：培养皿、试管、三角瓶、枪头、玻璃三角刮刀、接种环、镊子。在121℃下灭菌15 min。 高压蒸汽灭菌锅 培养皿 三角瓶 玻璃三角刮刀 接种环 微量移液器 枪头 棉花塞、封口膜、牛皮纸或旧报纸、橡皮筋 不能用脱脂棉：易吸水，容易引起污染。 酒精灯和酒精棉球 灭菌：杀死所有微生物。 消毒：杀死部分微生物（不包括芽孢和孢子）。 超净工作台 ①打开紫外灯和过滤风，灭菌30 min。 ②点燃酒精灯→酒精棉擦拭桌面→酒精棉球擦手。 酒精灯火焰附近旁进行 灼烧灭菌 防止杂菌污染 用细菌过滤器除菌：尿素加热会分解，用G6玻璃砂漏斗过滤。 什么是倒平板？ 将灭菌后的固体培养基倒入已灭菌的培养皿中，冷却凝固后制成的培养基。 Step1：培养基的配制和灭菌 ①将50 mL LB液体培养基、50 mL LB固体培养基和培养皿进行高压蒸汽灭菌。 无菌水 培养皿用牛皮纸包扎 Step2：倒平板 ②在酒精灯火焰旁将三角瓶中的固体培养基（冷却到60℃）倒入灭菌的培养皿中，置于水平放置上，并轻轻晃动，待凝固后形成平面。 超净台 Step3：接种后扩大培养 ③将斜面上培养的大肠杆菌菌种接种到灭菌后的液体培养基中，使其在37℃摇床培养12 h 。 恒温摇床 Step4：平板划线分离 ④用接种环在培养大肠杆菌的三角瓶中蘸取菌液一次，在固体培养基的平板上连续划线。将培养皿倒置，放在37 ℃恒温箱中培养12～24 h。 怎样在平板上划线？ 1次 2次 3次 4次 连续划线法 分区划线法 原因：随着划线次数的增加，菌数越来越少，最终在划线的末端出现由一个细菌繁殖而来的单个菌落。 为什么通过划线分离可得到单菌落？ 原因：既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基中造成污染。 恒温培养时培养皿倒置 培养皿倒置 皿盖 皿底 恒温培养箱 Step5：菌种的斜面保存 ⑤将接种环将单菌落取出，用划线法接种在斜面培养基上，37℃培养24 h后，置于4℃冰箱中保存。 斜面培养基 试管斜面培养基的制作 方法：将未凝固的含有琼脂的培养基加入试管中，灭菌后将试管斜放，令其冷却，固体培养基即成为斜面。 平板划线分离法 ①灼烧接种环 外焰 先灼烧后冷却：以免接种环温度太高，杀死菌种。 ②接种环冷却后，蘸取带菌培养物 ③在近火焰处，让带菌接种环在固体培养  基上划线 ④恒温培养箱中倒置培养 分区划线法 每次划线之前都要灼烧接种环。 总是从上一次划线的末端开始划线。 稀释涂布分离法 ①用无菌吸管吸取1mL细菌培养液加入另一个盛有9mL无菌水的试管中，混合均匀，以此制成10-1倍的稀释液。 ①梯度稀释菌液：10-5~10-7倍 ②滴加菌液