基因工程基本操作过程讲述.ppt

补:基因结构相关知识点 获得目的基因的方法 1）从基因文库中获取目的基因 基因表达载体的构建——核心 PCR技术—聚合酶链式反应 原理： 前提： 条件： 5.哪项不是基因表达载体的组成部分( ) A.启动子 B.终止密码 C.标记基因 D.目的基因 6.下列哪项不是将目的基因导入植物细胞的方法( ) A．基因枪法 B．显微注射法 C.农杆菌转化法 D．花粉管通道法 类别 项目 ? 复制 ? 转录 场所 特点 模板 原料 酶 能量 碱基 配对 产物 细胞核 只有DNA的一条链 四种核糖核苷酸 RNA聚合酶 ATP A-U C-G T-A G-C 细胞核 DNA的两条链 四种脱氧核苷酸 解旋酶、DNA聚合酶 ATP A-T C-G T-A G-C 两个双链DNA分子 一条单链mRNA 边解旋边复制， 半保留复制 边解旋边转录 5/ 3/ G—G T—C 3/ 5/ G—A C—C 5/ 3/ 引物Ⅱ G—G 变性 复性 延伸 1.目的基因DNA受热变性，解链； 2.引物与单链互补结合； 3.合成链在DNA聚合酶作用下进行延伸。 5/ 3/ A—G 引物Ⅰ 利用PCR技术扩增目的基因 PCR技术扩增过程 a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下， 断裂，形成_______ b、复性（55℃-60℃）：系统温度降低，引物 与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从 引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补 的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 目的基因的mRNA 单链DNA (cDNA） 双链DNA (即目的基因) 反转录 合成 1）反转录法： 以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 目的基因 推测 推测 化学合成 2）根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ： 1.微生物作受体细胞原因： 将目的基因导入微生物细胞 3.转化方法： 大肠杆菌 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 处理细胞→ 细胞→表达载体与感受态细胞混合→ _________细胞吸收DNA分子。 Ca2+ 感受态 感受态 2.常用菌： 其做为受体有何优点? 目的基因插入Ti质粒的T-DNA上 农杆菌 导入植物细胞 整合到受体细胞的染色体上 目的基因的遗传特性得以维持稳定和表达 1.农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物。Ti质粒的T-DNA可转移至受体细胞的染色体上 2.转化 如果显示出杂交带，就表明待测样品含有目的基因或目的基因已经转录。 1.下表关于基因工程中有关基因操作 的名词及对应的内容，正确的组合是 2、下列属于获取目的基因的方法的是( ) ①利用mRNA反转录形成②从基因组文库中提取 ③从受体细胞中提取 ④利用PCR技术 ⑤利用DNA转录 ⑥人工合成 A.①②③⑤ B.①②⑤⑥ C.①②③④ D.①②④⑥ 3.细菌的质粒分子带有一个抗菌素抗性基因，该抗性基因在基因工程中的主要作用是 A．提高受体细胞在自然环境中的耐药性 B．有利于对目的基因是否导入进行检测 C．增加质粒分子的分子量 D．便于与外源基因连接 4. 有关基因工程的叙述正确的是 A．限制酶只在获得目的基因时才用 B．重组质粒的形成是在细胞内完成的 C．质粒都可作为运载体 D．蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料 * * * * * * * * * * * * 复习提问： 1、基因工程需要的三种工具是什么？ 2、限制酶的作用是什么？ 产生的DNA片段末端通常有哪两种形式？ 3、DNA连接酶有哪两种？ 它们的作用是什么？ 4、能“缝合”平末端的是哪种酶？ 5、基因工程中最常用的运载体是什么？ 原核生物基因结构 真核生物基因结构 原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。 转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动，并以DNA分子的一条链为模板合成RNA。 转录完毕后，RNA链释放出来，紧接着RNA聚合酶也从DNA模板链上脱