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GB/T 5009.86—2003 《蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸含量测定方法》第二法 可测总抗坏血酸，总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸型。此法是将样品的还原型抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸，然后与2，4-二硝基苯肼作用，生成红色的脎。脎的量与总抗坏血酸含量成正比，将红色脎溶于硫酸后进行比色，由标准曲线计算样品中总VC。 （二）2，4—二硝基苯肼比色法 （1）原理 总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸，试样中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，再与 2,4-二硝基苯肼作用生成红色脎，根据肼在硫酸溶液中的含量与抗坏血酸含量成正比，进行比色定量。 （三）荧光法 （1）原理 还原性抗坏血酸 脱氢抗坏血酸 荧光化合物 荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比。 氧化 邻苯二胺 胡萝卜素对热及酸、碱比较稳定，但紫外线和空气中的氧可促进其氧化破坏。因系脂镕性维生素，故可用有机溶剂从食物中提取。 胡萝卜素本身是一种色素，在450 nm 波长处有最大吸收，故只要能完全分离，便可定性和定量。 在植物体内，胡萝卜素经常与叶绿素、叶黄素等共存，在提取β一胡萝卜素时，必须将胡萝卜素与其它色素分开。常用的方法有纸层析、柱层析和薄层层析法。 净化用层析介质采用氧化镁、氧化铝 避光 三、维生素D的测定 维生素D为固醇类衍生物，具抗佝偻病作用，其中最重要的是D2和D3。植物不含维生素D，但维生素D原在动、植物体内都存在。植物中的麦角醇为维生素D2原，经紫外照射后可转变为维生素D2，又名麦角钙化醇；人和动物皮下含的7-脱氢胆固醇为维生素D3原，在紫外照射后转变成维生素D3，又名胆钙化醇。以D3为最重要。 维生素D2 药片吃多了中毒。 分析方法中较好的是比色法和高效液相色谱法。是AOAC选定的正式方法。 维生素D的结构 原理 在三氯甲烷溶液中，维生素D与三氯化锑结合生成一种黄色化合物，呈色强度与维生素D含量呈正比。 食品中维生素D含量较低，其他维生素严重干扰其测定，因此测定前必须经柱层析除去干扰成分。层析介质为硅藻土、中性氧化铝 此法测定的是维生素D2和维生素D3的总量 （一）三氯化锑比色法 （二）液相色谱法 灵敏度较比色法高30倍以上，且操作简便，精度高，分析速度快。是目前分析维生素D的最好方法。 试样经皂化后，用苯提取不皂化物，蒸馏除苯，先采用反相C18柱分取维生素D，除去大部分杂质。进一步采用正相色谱分离，紫外检测定量。 反相色谱条件 色谱柱：Nucleosil C18,7.5mm*300mm 流动相：乙腈＋甲醇（1＋1） 流速：2.0 mL/min 紫外检测波长：254nm 正相色谱条件 色谱柱：正相柱Zorbax SIL,4.5mm*250mm 流动相：0.4%异丙酮的己烷溶液 流速：1.6 mL/min 紫外检测波长：254nm 注意事项 1、VD2 与VD3分不开 2、皂化时加入焦性没食子酸作为抗氧化剂 2、标样与试样在同样条件下皂化，消除了VD的热 异性化损失。 3、也可用硅藻土及皂土柱层析，除去甾醇、VA、胡萝卜素的干扰。 第三节 水溶性维生素的测定 水溶性维生素B1、B2和C，广泛存在于动植物组织中，饮食来源充足。但是由于它们本身的水溶性质，除满足人体生理、生化作用外，任何多余量都会从小便中排出。为避免耗尽，需要经常由饮食来提供。 水溶性维生素都易溶于水，而不溶于苯、乙醚、氯仿等大多数有机溶剂。在酸性介质中很稳定，既使加热也不破坏；但在碱性介质中不稳定，易于分解，特别在碱性条件下加热，可大部分或全部破坏。它们易受空气、光、热、酶、金属离子等的影响； 维生素B2对光，特别是紫外线敏感，易被光 线破坏；维生素C对氧、铜离子敏感，易被氧化。 根据上述性质，测定水溶性维生素时，一般都在酸性溶液中进行前处理。 维生素Bl、B2 盐酸水解 酶解 提取 纯化 维生素C通常采用草酸、草酸—醋酸、偏磷酸—醋酸溶液直接提取。在一定浓度的酸性介质中，可以消除某些还原性杂质对维生素C的破坏作用。草酸价廉，使用方便，对维生素C有很好 淀粉酶 木瓜蛋白酶 活性人造浮石 硅镁吸附剂 一、维生素B1的测定 维生素B1又名硫胺素、抗神经炎素，通常以游离态，或以焦磷酸酯形式存在于自然界