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第七章???? 细菌和噬菌体的重组和连锁 提 纲 一 细菌和病毒概述 二 细菌的遗传分析 三 噬菌体的遗传分析 低频重组与高频重组 突变型的筛选 (1). 根据菌落特点筛选：如Lac-突变菌株在伊红-美蓝培养基（EMB）上形成白色或粉红色菌落，而lac+菌落为有金属光泽的紫色菌落。 (2). 抗性突变型的筛选：将细菌涂布在含有某种抗生素或噬菌体的培养基上，能形成菌落的就是抗性突变菌株。 (3). 营养缺陷型的筛选：用印迹法(replica-plated method)把在完全培养基上生长的菌落影印到基本培养基上，鉴别出不能生长的克隆。再把它们转移到含有单一营养物质的培养基上，判定该突变型需要哪一种营养物质。 溶 菌 周 期 7. 细菌的交换和重组 在接合期间，细菌结合管常会自发断裂，结合的过程往往在染色体尚未完全转移时就已经终止，进入F-的Hfr染色体也随之断裂，一般很少有整条Hfr染色体转入F-细胞。因此在Hfr × F-杂交中选出的重组子大多数是F- 。 供体外基因子 F-内基因子 Merozygote(部分二倍体或半合子):受体细胞只接受部分供体染色体，这样的细胞称为部分二倍体或半合子。 在部分二倍体细胞中， 供体提供的部分DNA 在部分二倍体细胞中， 受体提供的完整的DNA F-受体很少得到完整的F因子。 2）只有偶数次交换才能保证细菌染色体的完整性，产生平衡的有活性的重组子。 不能存活 3）重组子只有一种类型， 相反的重组子(reciprocal recombinant)不会出现。所以细菌的交换不是一个交互过程，而是单向的。 平衡重组子 细菌交换和重组的特点： 8. 重组作图 紫红色菌落：lac+ade+ 780（亲本型） 白色或粉红色菌落：lac- ade+ 220（重组型） Hfr: lac+ade+strs × F-: lac-ade-strr 混合作用60min 在含链霉素的基本培养基上涂板 只有重组子能够存活： F-: ade+strr 1000 影印到EMB培养基上 重组子的产生 Lac- ade+ strr Lac+ ade+ strr Lac+ ade+ strs Lac- ade- strr Lac- ade- strs Lac+ ade+ strs Lac- ade- strr Lac+ ade- strs 重组频率的计算 = *100%=22%=22cM 220 1000 RFlac-ade lac-ade+ lac+ade++lac-ade+ *100% 用重组频率（RF）所测得的基因距离与用中断杂交技术以时间为单位的基因距离基本上是成正比的，大致是1分钟相当于20%重组值，即：1min=20cM = = 9. F ′因子和性导 3）性导(sex-duction or F ′ -duction) ：是指接合时由F′ 因子所携带的外源DNA整合到细菌染色体的过程。 或利用F ′因子形成的部分二倍体，将供体细胞 基因导入受体的过程，叫做 性导。 1） F′因子：带有一小段细菌染色体基因的F因子，称为F′ 因子 2） F′因子转移细菌基因不同于Hfr菌株： Hfr: thr+ leu+strs × F-:thr- leu- strr F′: thr+ leu+strs × F-:thr- leu- strr 含有链霉素的培养基上筛选 F-： thr+ leu+ strr重组子 F′: thr+ leu+ strr重组子 F+ F- Hfr F+ F- F+ F- 接合 吖黄素 高频重组 低频重组 整合 F ′ F ′ 重组频率较低 F-,F+,Hfr,F ′细菌的相互转化